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汕头大学海洋科学接受调剂
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Hliotrope

木虫 (著名写手)

[求助] 制感受态的氯化钙溶液 已有3人参与

制感受态的氯化钙溶液时间长了会有影响吗?最近做化转一直没转出来,怀疑是感受态的问题,用的氯化钙溶液是去年五月十三号师姐制的,不知道是不是氯化钙的问题。
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Someone
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123q明

金虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
2楼: Originally posted by 鬼羽帝魂 at 2014-02-24 10:00:20
氯化钙要放在4度保存。感受态不好应该不是它的原因。制备感受态需要一直冰上操作。你如果不放心,就重新制备,不会花很长时间,但记得制备的氯化钙和甘油都要灭菌以后放4度保存。

我想请教一下,关于感受态的问题,我一直都是按着步骤一步一步做的,但是感受态一直不行,上面不长菌,不知道什么原因,而且我用氯化钙洗的时候,都洗四遍,菌摇到光密度值为4.7,,前几天做的又失败了,请给予指点。。。
3楼2014-02-24 13:25:39
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鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)

★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2014-02-24 10:43:18
氯化钙要放在4度保存。感受态不好应该不是它的原因。制备感受态需要一直冰上操作。你如果不放心,就重新制备,不会花很长时间,但记得制备的氯化钙和甘油都要灭菌以后放4度保存。
2楼2014-02-24 10:00:20
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鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
3楼: Originally posted by 123q明 at 2014-02-24 13:25:39
我想请教一下,关于感受态的问题,我一直都是按着步骤一步一步做的,但是感受态一直不行,上面不长菌,不知道什么原因,而且我用氯化钙洗的时候,都洗四遍,菌摇到光密度值为4.7,,前几天做的又失败了,请给予指点 ...

菌先要菌种活化,然后稍微扩大培养。再然后大量摇菌,这时要注意,摇菌到OD值为0.6-0.8,再进行离心收集菌体。
注意:培养基不能加抗生素的。
4楼2014-02-24 15:35:57
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西门吹雪170

荣誉版主 (职业作家)

★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流经验! 2014-02-24 18:30:27
我们实验室的CaCl2是过滤除菌的,你要不要试试这种方法?甘油可以高压灭菌后再加到配制的CaCl2溶液中。此外,制作感受态不成功的原因有很多,比如原始菌种的活性本来就不好
植根于内心的修养;无需提醒的自觉;以约束为前提的自由;为别人着想的善良
5楼2014-02-24 16:29:45
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