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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 关于敲除片段的浓度
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思念de季节

金虫 (小有名气)

[求助] 关于敲除片段的浓度 已有2人参与

在用敲除片段敲除大肠杆菌时，有人说敲除片段的浓度越浓越好，甚至到了1000ng/ul，可是加入的总量不是500-1000ng之间吗？真的有必要这么高吗？怎么才能做到这么高？为什么我回收后才最多100啊？求敲除达人指点！！
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1楼 2014-02-20 17:06:20
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summermio

新虫 (初入文坛)
★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-07-24 09:54:21
我感觉在600~1000ng效果比较好。当然片段浓度只是一方面，感受态细胞质量和red 重组酶表达量也很重要。 至于你回收的片段浓度比较低的问题， 我一般都是4管pcr产物一起胶回收， 差不多能有300ng/ul
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5楼2014-07-23 20:34:34
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yang0071

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
总量在0。1~1ug之间即可
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2楼2014-02-20 21:04:43
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思念de季节

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by yang0071 at 2014-02-20 21:04:43
总量在0。1~1ug之间即可

请问你也做大肠杆菌敲除吗？这个量能成功敲除吗？
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3楼2014-02-20 21:38:33
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三蛰

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
思念de季节(kx444555代发): 金币+4, 鼓励交流 2014-02-21 09:55:37
思念de季节: 金币+11, ★★★很有帮助 2014-03-04 08:37:18
其实这个是要看mol数的，浓度适中时效率最高的，不同长度的目标基因，需要的也不一样。敲除这东西看着书面很简单，每一步都需要注意，有可能不是你的浓度问题，多方面的考虑考虑。多向做过的人请教。
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我不会！
4楼2014-02-21 09:26:58
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