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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » takara公司的 T-Vector pMD19 （simple）的体系
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东农破晓

新虫 (初入文坛)

[求助] takara公司的 T-Vector pMD19 （simple）的体系 已有3人参与

实验室新购买的takara公司的  T-Vector pMD19 （simple），想用于PCR产物胶回收后连接 测序，但说明书中提到：
1.    在微量离心管中配制如下反应液（总体积为5  μl）。
T-Vector pMD19 (Simple)    1  μl
PCR产物或Control Insert   1  μl (0.1 - 0.3 pmol)*
dH2O                                 3  μl
2.    向以上的DNA溶液中加入等体积（5  μl）DNA  Ligation  Kit <Mighty Mix> (Code No. 6023)，充分混匀。
3.    16℃反应30分钟。
想问一下DNA  Ligation  Kit 可以不加吗 或者用什么代替 ？实验室没买这个试剂盒
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1楼 2014-02-20 10:47:59
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shiyiyaya

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-03-30 16:14:54
简单，只使用T-Vector pMD19 ，用平常的T4DLig连接即可。
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2楼2014-02-20 11:02:28
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西门吹雪170

荣誉版主 (职业作家)
晚上回实验室帮你看看，跟我们实验室的有点不一样
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植根于内心的修养；无需提醒的自觉；以约束为前提的自由；为别人着想的善良
3楼2014-02-20 13:15:40
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西门吹雪170

荣誉版主 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
东农破晓(kx444555代发): 金币+3, 鼓励交流 2014-06-13 09:32:06
Solution I ：5uL
目的基因：4uL
pMD19-T：1uL
载体DNA和插入DNA的摩尔数比一般为：0.03 pmol ：0.03-0.3 pmol
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4楼2014-02-20 19:38:01
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东农破晓

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 西门吹雪170 at 2014-02-20 19:38:01
Solution I ：5uL
目的基因：4uL
pMD19-T：1uL
载体DNA和插入DNA的摩尔数比一般为：0.03 pmol ：0.03-0.3 pmol

Solution I我们的试剂盒里没有啊 用原来pMD18-T 也可以哈？
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5楼2014-02-21 10:44:08
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西门吹雪170

荣誉版主 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by 东农破晓 at 2014-02-21 10:44:08
Solution I我们的试剂盒里没有啊 用原来pMD18-T 也可以哈？...

你不是买的pMD19-T吗？假如是pMD18-T那也按照试剂盒来做，可以适当延长连接时间
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6楼2014-02-21 11:43:28
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dyq870426

新虫 (初入文坛)
你用solution I做了吗？我也定了19-T simple ，不知道用18T中的solution能不能行
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7楼2014-06-12 15:51:09
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zry921

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

想问下楼主你试了吗？用pMD18-T中的Solution 1也可以吗？
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8楼2015-01-05 16:30:44
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志存高远628

金虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 西门吹雪170 at 2014-02-20 19:38:01
Solution I ：5uL
目的基因：4uL
pMD19-T：1uL
载体DNA和插入DNA的摩尔数比一般为：0.03 pmol ：0.03-0.3 pmol

请问Takara DNA Ligation Kit中的Solution II,及III是干什么用的，第一次使用这个Kit做连接，就只加了Solution I，进行16度连接1h,这样能连接上吗？谢谢
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9楼2015-03-09 17:33:22
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迷失的流星

新虫 (初入文坛)
楼主问题解决了吗？我也有同样的问题:
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10楼2015-07-17 09:16:33
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