Znn3bq.jpeg
汕头大学海洋科学接受调剂
查看: 6965  |  回复: 9

东农破晓

新虫 (初入文坛)

[求助] takara公司的 T-Vector pMD19 (simple)的体系 已有3人参与

实验室新购买的takara公司的  T-Vector pMD19 (simple),想用于PCR产物胶回收后连接 测序,但说明书中提到:
1.    在微量离心管中配制如下反应液(总体积为5  μl)。
T-Vector pMD19 (Simple)    1  μl
PCR产物或Control Insert   1  μl (0.1 - 0.3 pmol)*
dH2O                                 3  μl
2.    向以上的DNA溶液中加入等体积(5  μl)DNA  Ligation  Kit <Mighty Mix> (Code No. 6023),充分混匀。
3.    16℃反应30分钟。
想问一下DNA  Ligation  Kit 可以不加吗 或者用什么代替 ?实验室没买这个试剂盒
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

shiyiyaya

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流! 2014-03-30 16:14:54
简单,只使用T-Vector pMD19 ,用平常的T4DLig连接即可。
2楼2014-02-20 11:02:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

西门吹雪170

荣誉版主 (职业作家)

晚上回实验室帮你看看,跟我们实验室的有点不一样
植根于内心的修养;无需提醒的自觉;以约束为前提的自由;为别人着想的善良
3楼2014-02-20 13:15:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

西门吹雪170

荣誉版主 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
东农破晓(kx444555代发): 金币+3, 鼓励交流 2014-06-13 09:32:06
Solution I :5uL
目的基因:4uL
pMD19-T:1uL
载体DNA和插入DNA的摩尔数比一般为:0.03 pmol :0.03-0.3 pmol
植根于内心的修养;无需提醒的自觉;以约束为前提的自由;为别人着想的善良
4楼2014-02-20 19:38:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

东农破晓

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 西门吹雪170 at 2014-02-20 19:38:01
Solution I :5uL
目的基因:4uL
pMD19-T:1uL
载体DNA和插入DNA的摩尔数比一般为:0.03 pmol :0.03-0.3 pmol

Solution I我们的试剂盒里没有啊 用原来pMD18-T 也可以哈?
5楼2014-02-21 10:44:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

西门吹雪170

荣誉版主 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by 东农破晓 at 2014-02-21 10:44:08
Solution I我们的试剂盒里没有啊 用原来pMD18-T 也可以哈?...

你不是买的pMD19-T吗?假如是pMD18-T那也按照试剂盒来做,可以适当延长连接时间
植根于内心的修养;无需提醒的自觉;以约束为前提的自由;为别人着想的善良
6楼2014-02-21 11:43:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dyq870426

新虫 (初入文坛)

你用solution I做了吗?我也定了19-T simple ,不知道用18T中的solution能不能行
7楼2014-06-12 15:51:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zry921

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

想问下楼主你试了吗?用pMD18-T中的Solution 1也可以吗?
8楼2015-01-05 16:30:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

志存高远628

金虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 西门吹雪170 at 2014-02-20 19:38:01
Solution I :5uL
目的基因:4uL
pMD19-T:1uL
载体DNA和插入DNA的摩尔数比一般为:0.03 pmol :0.03-0.3 pmol

请问Takara DNA Ligation Kit中的Solution II,及III是干什么用的,第一次使用这个Kit做连接,就只加了Solution I,进行16度连接1h,这样能连接上吗?谢谢
9楼2015-03-09 17:33:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

迷失的流星

新虫 (初入文坛)

楼主问题解决了吗?我也有同样的问题:
10楼2015-07-17 09:16:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 东农破晓 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 0854调剂 +11 长弓傲 2026-04-12 14/700 2026-04-14 16:07 by 逆水乘风
[考研] 一志愿中南大学 0855 机械 286 求调剂 +11 不会吃肉 2026-04-12 11/550 2026-04-13 21:59 by bljnqdcc
[考研] 0831生医工第一轮调剂失败求助 +12 小熊睿睿_s 2026-04-11 16/800 2026-04-12 16:28 by 钰璞
[考研] 一志愿郑州大学 22408 305分求调剂 +5 安小满zzz 2026-04-08 5/250 2026-04-12 00:41 by 蓝云思雨
[考研] 药学专硕调剂 +8 ? 一路生?花? 2026-04-10 10/500 2026-04-11 21:21 by zhouxiaoyu
[考研] 0854调剂 +5 音像店听花鼓戏 2026-04-10 5/250 2026-04-11 10:49 by qingpingzhu
[考研] 农学0904 312求调剂 +6 Say Never 2026-04-10 6/300 2026-04-11 10:33 by wwj2530616
[考研] 085410-273求调剂 +6 X1999 2026-04-10 6/300 2026-04-11 10:32 by Delta2012
[考研] 289 分105500药学专硕求调剂(找B区学校) +6 白云123456789 2026-04-09 8/400 2026-04-10 21:13 by zhouxiaoyu
[考研] 本9 一志愿西工大085601 324求调剂 +5 wysyjs25 2026-04-10 5/250 2026-04-10 16:57 by luoyongfeng
[考研] 085800 能源动力求调剂 +6 阿biu啊啊啊啊啊 2026-04-10 6/300 2026-04-10 15:03 by hemengdong
[考研] 344求调剂 +7 丶风雪夜归人丶 2026-04-09 7/350 2026-04-10 12:05 by pengliang8036
[考研] 一志愿华东师范生物学326分,求调剂 +8 刘墨墨 2026-04-09 8/400 2026-04-10 12:00 by pengliang8036
[考研] 求调剂 +11 翩翩一书生 2026-04-09 13/650 2026-04-10 10:27 by liuhuiying09
[考研] 初试分332,一志愿报考西北工业大学, +11 故人?? 2026-04-09 11/550 2026-04-09 21:54 by JineShine
[考研] 本科211 工科085400 280分求调剂 可跨专业 +3 LZH(等待调剂中 2026-04-09 3/150 2026-04-09 21:29 by wutongshun
[考研] 求机械专硕297第二批调剂 +5 拾柒12。 2026-04-08 5/250 2026-04-09 16:43 by 允当适度
[考研] 085501机械英二77总分294求调剂,接受跨专业学习 +6 守法公民亓纪 2026-04-08 6/300 2026-04-09 15:55 by wp06
[考研] 化学工程与技术专业一志愿哈工程 291分B区 国家级大创负责人 有一作论文 +13 Emmy~ 2026-04-09 13/650 2026-04-09 14:47 by only周
[考研] 考研求调剂 +4 雯??? 2026-04-08 4/200 2026-04-08 21:44 by 土木硕士招生
信息提示
请填处理意见