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justdilo

木虫 (著名写手)

[交流] 熔解曲线数据求分析

本人荧光菜鸟一枚，今天第一次做，求各位虫友帮忙分析熔解曲线的数据。
本人用的是三步法，61度退火，72度延伸30秒，伯乐iQ5，SYBR Green 1。各图中，A-G是不同地理种群的样品，H是阴性对照。
求虫友不吝赐教。
下面依次是目标基因、内参基因1、内参基因2的数据和峰图。
熔解曲线数据求分析
目标-1.jpg


熔解曲线数据求分析-1
内参1.jpg


熔解曲线数据求分析-2
内参2.jpg

另外偶然发现当全部样品一起分析时和某样品单独分析时数据有很大差异，求指教。
熔解曲线数据求分析-3
比较.jpg



[ Last edited by justdilo on 2014-1-21 at 21:31 ]
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1楼 2014-01-21 21:26:48
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yb19841014

铁杆木虫 (著名写手)
★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-01-22 02:34:24
justdilo: 金币+3, 多谢 2014-01-29 13:59:31
我觉得内参的CT值有些偏大啊  而且从峰图上看 有杂带啊 这个杂带肯定会影响样品的CT值的  另外阴性对照也不行啊 个人觉得你现在的数据完全没有任何意义
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2楼2014-01-21 22:47:45
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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
justdilo(kx444555代发): 金币+5, 鼓励交流 2014-01-22 10:12:35
justdilo: 金币+5 2014-01-29 13:59:40
个别样品的溶解曲线有双峰，前面的小峰预示着含有比扩增片段小的双链DNA杂质。
阈值线划线不同，Ct值就发生变动，Ct值20多是正确的。
至少要有一个样品作为标准品，各样品的数值与之比较，得到一个相对定量。
赞一下 回复此楼
4楼2014-01-22 10:11:58
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sjmr12213楼
2014-01-21 23:53   回复  
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