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Probiotics

木虫 (正式写手)

[求助] TRIzol提取细胞总RNA,为何只有处理组没有结果? 已有1人参与

最近一直在用Invitrogen公司的TRIzol提取细胞的总RNA,在跑电泳时,空白对照出现了3条亮带,其中28S的是18S的两倍宽,亮度清晰。而我的两个处理组只是在5S的位置有很浅的弥散带。不知怎么回事?
1、采用的6孔板培养贴壁细胞,6孔板接种的细胞量都是相同的,一个细胞培养瓶里面出来的。2个孔用1mL TRIzol处理,获得1个空白对照管,2个处理管。
2、3个管RNA提取条件完全相同,同时做的。
3、在用异丙醇沉淀后,对照管明显能看出有沉淀,而2个处理管底部沉淀很难看出,即便是有的话也非常少。
提了几次RNA了,都出现了3中说的情况,对照沉淀多,处理组沉淀少或看不到的情况,这是为什么呢?

电泳图如下:

第1张图是之前提的结果,左边的为空白对照,右边的是处理组,图中可知,RNA都出现明显降解,处理组更为严重。
有人建议提高细胞浓度试试,第2张图是刚刚提的结果,在细胞浓度上有所提高。第1泳道为空白对照,2、3泳道分别是处理组1和2。
对照组和处理组为何出现如此差异?

烦请高人指点!!!多谢啦!!!
TRIzol提取细胞总RNA,为何只有处理组没有结果?
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TRIzol提取细胞总RNA,为何只有处理组没有结果?-1
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[ Last edited by Probiotics on 2014-1-7 at 21:24 ]
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张志鸿

木虫 (小有名气)

跟你的效果一样,我提的是老鼠组织的的,一直降解
最好的状态是保持思考习惯和成功信念。
2楼2014-01-09 15:57:51
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tuzkileon

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

28s和18s没有条带,5s有条带,说明降解很明显。电泳的时候最好换新配的电泳液,注意实验操作,全部试验仪器都要灭菌消毒,操作台用酒精擦拭,RNA提取完成后最好尽快跑胶。做胶的时候你用什么?核酸染料还是EB?
3楼2014-10-19 20:21:13
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