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GracePoppy

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[求助] Bradford法定量蛋白质已有2人参与

请问大家，谁经常用Bradford法定量蛋白呀，我定了几次蛋白，标准曲线的R2老是达不到三个9，每次只能达到1个9，请各位给我提供下用此方法定量的详细步骤吧，越详细越好，如从试剂配制开始。要是有完整的protocal的话，就更好了。还有决定实验成败的注意事项有哪些呢，谢谢。

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1楼 2014-01-03 19:17:43

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fuyuandj86

版主 (著名写手)

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【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+3, 鼓励交流！ 2014-01-04 00:28:40

尽量按照说明书在规定的线性范围内做标准曲线, 和Bradford的染料反应后要统一等5分钟,等颜色稳定下来再测,但是不要等的时间太长
不过话又说回来, 标准曲线R2达不到3个9又不碍事,我Bradford标准曲线从来都到不了那么好的线性
这个Bradford定量浓度本来就有误差, 他的显色机制和你氨基酸的组成有关,如果你的蛋白里Arg,Trp,Phe,Pro比较多,那他颜色就会显得更深. 结果就是你用不同的蛋白做标准曲线都会有差别, 标准曲线搞那么精细完全没必要,凑合能用就行了

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The doer of good becomes good, the doer of evil becomes evil.

2楼2014-01-03 23:17:31

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GracePoppy

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引用回帖:

2楼: Originally posted by fuyuandj86 at 2014-01-03 23:17:31
尽量按照说明书在规定的线性范围内做标准曲线, 和Bradford的染料反应后要统一等5分钟,等颜色稳定下来再测,但是不要等的时间太长
不过话又说回来, 标准曲线R2达不到3个9又不碍事,我Bradford标准曲线从来都到不了那么 ...

恩恩，谢谢。今天我又做了一次，达到了0.9988.这个结果还算满意吧