| 查看: 8986 | 回复: 10 | ||
| 本帖产生 1 个 MolEPI ，点击这里进行查看 | ||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||
[求助]
关于TAKARA的RT-PCR试剂盒说明书~ 已有3人参与
|
||
|
最近买了TAKARA的RT-PCR试剂盒，RR014A，说明书倒是很详细，但还是有地方不太明白，希望有用过的前辈指点指点啊~~ 1 反转录前有个变性退火的过程，65℃ 5 min，接着有个4℃，但没说多长时间，是怎么个意思呢？加了反转录酶后的延伸部分也有 同样的问题，只有4℃，没有多长时间~ 2 试剂盒里面带的三个反转录引物，Oligo dT Primer，Random 6 mers和Specific Primer，做未知基因的话，前两个之中哪个好一点呢？ 3 还有就是PCR部分说明书上写了两步法和三步法，这又是怎么回事？一般不是只有一步法和两步法吗，三步法是什么意思？ |
回复此楼» 猜你喜欢
留学--博士招生
已经有16人回复
-
化学工程，本211，求调剂，ab区不限
已经有4人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有95人回复
-
湖北师范大学招调剂啦
已经有9人回复
-
邵阳学院食品与化学工程学院硕士调剂
已经有0人回复
-
天津商业大学 生物与医药课题组招生
已经有0人回复
-
生物化工学硕招收调剂
已经有0人回复
-
广东石油化工学院2026年硕士研究生需要多名生物，制药工程，食品专业的调剂生
已经有0人回复
-
317分 一志愿江南大学 化学工程学硕 求调剂
已经有6人回复
-
化工申博
已经有3人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- RT-PCR最最基本的入门
已经有7人回复
- 大片段PCR扩增求助
已经有23人回复
- 选购什么样的RT-PCR试剂盒
已经有6人回复
- 关于RT-PCR中逆转录试剂盒的问题！
已经有18人回复
- Takara的逆转录试剂盒怎么样呢？和Toyobo的比起来呢？
已经有10人回复
- 大家做RT-qPCR设计引物用的什么软件呀？
已经有15人回复
- 实时荧光RT-PCR实验的相关问题
已经有8人回复
- 请教RNA提取高手：反转录PCR（RT-PCR)中DNA的去除
已经有18人回复
- 求助:TAKARA 10*PCR 缓冲液的配制!
已经有7人回复
- 求助！关于RT-PCR的问题！
已经有20人回复
- 3‘RACE inner PCR 电泳结果总是有弥散现象回收条带不成带状什么原因啊？
已经有17人回复
- RNA浓度好低 适合做RT-PCR吗？
已经有7人回复
- 请教real time pcr问题，谢谢！
已经有10人回复
- RNA提取时超净工作台的应用等？
已经有8人回复
- ＲＴ－ＰＣＲ问题求助
已经有18人回复
- 关于定量pcr的体系，RT-pcr，Q-pcr
已经有3人回复
- 【求助/交流】引物Tm值很高，PCR求助
已经有17人回复
- 【求助/交流】谁用SMART的cDNA文库构建试剂盒？？？
已经有6人回复
- 【求助/交流】大家来讨论下RT-PCR的试剂盒吧！
已经有12人回复
- 【求助/交流】Takara试剂盒，合成cDNA看不到弥散，着急啊
已经有16人回复
冷雁孤旅
木虫 (著名写手)
- 应助: 39 (小学生)
- 金币: 3724.6
- 散金: 600
- 红花: 22
- 帖子: 1767
- 在线: 525.6小时
- 虫号: 1816501
- 注册: 2012-05-14
- 专业: 环境微生物学
7楼2013-12-28 10:27:27
西瓜
荣誉版主 (知名作家)
- MolEPI: 50
- 应助: 94 (初中生)
- 贵宾: 3.157
- 金币: 1849.6
- 散金: 11458
- 红花: 116
- 沙发: 21
- 帖子: 7553
- 在线: 1449.5小时
- 虫号: 271749
- 注册: 2006-08-13
- 性别: GG
- 专业: 细胞衰老
- 管辖: 分子生物
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
liangpz: 金币+8, ★★★★★最佳答案 2013-12-28 09:52:14
myprayer: 金币+5, MolEPI+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2013-12-28 11:42:55
感谢参与，应助指数 +1
liangpz: 金币+8, ★★★★★最佳答案 2013-12-28 09:52:14
myprayer: 金币+5, MolEPI+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2013-12-28 11:42:55
|
1.4℃是产物保存的温度，4℃前的反应已经结束啦，可以收了。仪器上4℃这步你可以设成无穷大，或者24小时之类的，万一没有及时收，产物在4℃下也能存很久。 2. Specific Primer是针对已知基因专门设计的，试剂盒上应该是没有的哦。 你的是未知基因，Oligo dT Primer和Random 6 mers建议一起用，更容易获得全长的RNA。 3.“PCR部分说明书上写了两步法和三步法”这个是针对PCR程序说的。这里的两步是指退火和延伸用同一个温度，三步则是传统PCR的变性、退火、延伸都用不同温度。两步法因为不用变化温度，PCR耗时相对较短；三步法则可以有效提高反应的特异性和扩增效率。时间充裕的话还是用三步法吧。 你说的一步法和两步法指的是反转录和定量PCR这两个过程是不是在一起。通俗地说，如果你先做反转录，然后取cDNA出来再做定量PCR，这个叫做两步法；如果你一次性把反转录和定量PCR的东西都加到一个管子里，反转录之后不开盖，直接做定量PCR，这个叫做一步法（不是所有试剂盒都能用一步法的哈，不清楚时别乱来  ）。一步法比较省事，而且不开盖可以降低污染几率，但是反转录出来的cDNA只能用一次，适合土豪；两步法的话比较省东西，得到的cDNA可以多次使用。我建议你用两步法。 |
2楼2013-12-27 22:21:48
冷雁孤旅
木虫 (著名写手)
- 应助: 39 (小学生)
- 金币: 3724.6
- 散金: 600
- 红花: 22
- 帖子: 1767
- 在线: 525.6小时
- 虫号: 1816501
- 注册: 2012-05-14
- 专业: 环境微生物学
3楼2013-12-27 22:50:04
cicelyzh
铁杆木虫 (职业作家)
- MolEPI: 10
- 应助: 1662 (讲师)
- 金币: 8693.8
- 红花: 72
- 帖子: 3516
- 在线: 456小时
- 虫号: 1614001
- 注册: 2012-02-13
- 专业: 生物化学
4楼2013-12-28 07:09:30
