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fangyuanpan

银虫 (小有名气)

[求助] 做蛋白质纯化 该怎么脱盐 已有4人参与

最近做原核表达,目的蛋白通过Ni柱已经收集,下一步想脱盐,但是没头绪,请各位帮忙指点一下。用G-25柱,洗脱液用什么洗脱,怎么检测目的蛋白是否出来。
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lpzl

木虫 (正式写手)

同求。。。
Start_everyday_with_a_new_hope,_leave_bad_memories...
2楼2013-12-27 13:18:52
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剑客心语

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,分子生物期待你更多精彩。 2013-12-27 17:05:47
楼主所说的盐分是指什么?NI柱纯化的蛋白所去除一般是尿素或咪唑,对此我一般采用透析法(用PBS或Tris-HCl缓冲液作为透析液,蛋白中的盐分通过透析袋置换到透析液中)
一柄驻剑,一朝旅人,一颗常心,一生志言……行疆漫漫,品味一生……
3楼2013-12-27 16:06:30
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lihe131

至尊木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
透析,或者过分子筛,或者反复浓缩稀释。
4楼2013-12-27 23:57:23
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fuyuandj86

版主 (著名写手)

己所不欲,勿施于人

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流! 2013-12-28 21:14:36
你都自己说了用G-25除盐了还问怎么除盐
洗脱液就用你想用于保存蛋白的缓冲液
用Bradford判断目的蛋白是否出来
The doer of good becomes good, the doer of evil becomes evil.
5楼2013-12-28 03:06:30
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flll2014

铜虫 (小有名气)

我们用的是PD-10柱子,是镍柱说明书给推荐的,你看下你的镍柱说明书怎么写的,检测目的蛋白可用紫外检测仪,很明显能看到一个蛋白峰和一个盐峰
6楼2014-08-16 15:21:33
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zero19871029

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

根据你的蛋白大小选择合适孔径的柱子,然后不断用你的目的缓冲液超滤就可以了,如果是想要除镍的话建议先做个透析,那样效果比较好~
7楼2014-08-16 17:24:31
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