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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 做蛋白质纯化 该怎么脱盐
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fangyuanpan

银虫 (小有名气)

[求助] 做蛋白质纯化 该怎么脱盐 已有4人参与

最近做原核表达，目的蛋白通过Ni柱已经收集，下一步想脱盐，但是没头绪，请各位帮忙指点一下。用G-25柱，洗脱液用什么洗脱，怎么检测目的蛋白是否出来。
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1楼 2013-12-27 13:11:59
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lpzl

木虫 (正式写手)
同求。。。
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Start_everyday_with_a_new_hope,_leave_bad_memories...
2楼2013-12-27 13:18:52
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剑客心语

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2013-12-27 17:05:47
楼主所说的盐分是指什么？NI柱纯化的蛋白所去除一般是尿素或咪唑，对此我一般采用透析法（用PBS或Tris-HCl缓冲液作为透析液，蛋白中的盐分通过透析袋置换到透析液中）
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一柄驻剑，一朝旅人，一颗常心，一生志言……行疆漫漫，品味一生……
3楼2013-12-27 16:06:30
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lihe131

至尊木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
透析，或者过分子筛，或者反复浓缩稀释。
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4楼2013-12-27 23:57:23
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fuyuandj86

版主 (著名写手)

己所不欲，勿施于人

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-12-28 21:14:36
你都自己说了用G-25除盐了还问怎么除盐
洗脱液就用你想用于保存蛋白的缓冲液
用Bradford判断目的蛋白是否出来
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The doer of good becomes good, the doer of evil becomes evil.
5楼2013-12-28 03:06:30
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flll2014

铜虫 (小有名气)
我们用的是PD-10柱子，是镍柱说明书给推荐的，你看下你的镍柱说明书怎么写的，检测目的蛋白可用紫外检测仪，很明显能看到一个蛋白峰和一个盐峰
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6楼2014-08-16 15:21:33
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zero19871029

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

根据你的蛋白大小选择合适孔径的柱子，然后不断用你的目的缓冲液超滤就可以了，如果是想要除镍的话建议先做个透析，那样效果比较好~
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7楼2014-08-16 17:24:31
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