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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 专业学科区 » 食品 » 粮油与蛋白 » 有关离子交换层析的问题
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gogoxiaobai

金虫 (小有名气)

[交流] 有关离子交换层析的问题

我最近在做离子交换层析初步分离纯化多肽，开始用了Q Sepharose Fast Flow分离，但是梯洗得到的肽组分活性最高只有30%，而上样峰的活性差不多达到30%—40%，后来考虑用SP Sepharose Fast Flow分离纯化，但是这个填料更不适合，梯洗后组分的活性基本没有，活性全在上样峰里，我想请教各位高手，我是该用Q Sepharose Fast Flow继续分离纯化？还是不用离子交换层析这一步，直接做下一步G-25凝胶脱盐？
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1楼 2013-12-22 20:50:06
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)
★
gogoxiaobai(金币+1): 谢谢参与
原来楼主喜欢把样品叫做上样峰，把穿透液叫做穿透峰。就我纯化酶的经验来说，如果通过柱层析法来做，即使穿透液没有酶，酶全都被吸附了，再洗脱下来之后也不能保证没有损失，只是损失的幅度大小不同。
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7楼2014-01-25 19:25:51
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hsd3521

主管区长 (知名作家)
★
gogoxiaobai(金币+1): 谢谢参与
一步分离纯化得到纯品的可能性很小，如果楼主的活性峰和杂质峰在离子色谱阶段分开，那就可以了，即使是穿透峰有活性，但是这不能保证纯度，最好还是再加个分子筛
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2楼2013-12-22 21:19:37
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gogoxiaobai

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by hsd3521 at 2013-12-22 01:19:37
一步分离纯化得到纯品的可能性很小，如果楼主的活性峰和杂质峰在离子色谱阶段分开，那就可以了，即使是穿透峰有活性，但是这不能保证纯度，最好还是再加个分子筛

离子交换层析只是我分离纯化的第一步，之后还要走G-25，RP-HPLC。但是穿透峰有活性也没有用啊，梯洗后得到的组分有活性才可以啊
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3楼2013-12-22 21:22:26
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hsd3521

主管区长 (知名作家)
引用回帖:
3楼: Originally posted by gogoxiaobai at 2013-12-22 21:22:26
离子交换层析只是我分离纯化的第一步，之后还要走G-25，RP-HPLC。但是穿透峰有活性也没有用啊，梯洗后得到的组分有活性才可以啊...

对于这个问题 我跟楼主理解不一样 如果是想要得到纯品 即使穿透峰有活性 但是吸附峰没有活性 也说明纯化倍率提升了 只是可能因为蛋白特性和填料特性没有很好的结合好 同时不能有效保证纯度 所以还需要进一步纯化 及液相验证等
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5楼2013-12-22 21:40:01
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