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pet-28b载体lacI缺失两个碱基会导致什么结果
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| 在用pet-28b载体和BL21（DE3）宿主菌构建工程菌之后，测序发现pet-28b质粒上lacI基因缺失了两个碱基，这与我的目的蛋白不表达有关系么？ |
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2楼2013-12-09 11:30:35
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【答案】应助回帖
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574759350: 金币+3, ★★★很有帮助 2013-12-09 16:56:08
574759350: 金币+3, ★★★很有帮助 2013-12-09 16:56:08
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更正我上面错误的说法， 表达菌株BL21(DE3)上带有lacI基因，其表达的LacI蛋白在非诱导的条件下，既可以与T7 RNA polymerase前的lac UV5启动子后的operator O结合，也可以与pET28a载体T7启动子后的Operator O结合，从而在非诱导情况下阻遏目的基因表达 虽然pET-28a载体的LacI发生碱基缺失突变，由于细菌基因组本身仍能表达正常的LacI，所以总的来说在非诱导情况下仍能阻遏蛋白表达 这两个碱基的缺失与你的蛋白不表达无关 |
5楼2013-12-09 14:35:21
6楼2013-12-10 01:08:53
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BL21(DE3) F– ompT gal dcm lon hsdSB(rB- mB-) λ(DE3 [lacI lacUV5-T7 gene 1 ind1 sam7 nin5]) an E. coli B strain with DE3, a λ prophage carrying the T7 RNA polymerase gene and lacIq Transformed plasmids containing T7 promoter driven expression are repressed until IPTG induction of T7 RNA polymerase from a lac promoter. Derived from B834 (Wood, 1966) by transducing to Met+. See the original Studier paper or the summary in Methods in Enzymology for more details. Whole genome sequence available [3] |
7楼2013-12-10 15:00:37
8楼2013-12-11 03:01:35
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9楼2013-12-11 03:24:28
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1.genotype里写得是wtlacI，介绍里才写得Iq 2.NCBI 里organism里选择 Escherichia coli BL21(DE3) (taxid:469008) 用lacIq的promoter blast Query 1 GACACCATCGAATGGTGCAAAACCTTTCGCGGTATGGCATGATAGCGCCCGGAA 54 ||||||||||||||| |||||||||||||||||||||||||||||||||||||| Sbjct 748652 GACACCATCGAATGGCGCAAAACCTTTCGCGGTATGGCATGATAGCGCCCGGAA 748705 Query 1 GACACCATCGAATGGTGCAAAACCTTTCGCGGTATGGCATGATAGCGCCCGGAA 54 ||||||||||||||| |||||||||||||||||||||||||||||||||||||| Sbjct 337117 GACACCATCGAATGGCGCAAAACCTTTCGCGGTATGGCATGATAGCGCCCGGAA 337064 其中第一段是DE3integration 第二段是genome，其中-35区的 gtgcaa是LacIq promoter gcgcaa是wt，按照这个序列，在BL21 de3里面是两段wtlacI, 当然我自己没有做过实验验证这个。 |
10楼2013-12-11 07:05:49
