应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » pet-28b载体lacI缺失两个碱基会导致什么结果
51/1返回列表
查看: 2933  |  回复: 9
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

574759350

铁虫 (小有名气)

[求助] pet-28b载体lacI缺失两个碱基会导致什么结果

在用pet-28b载体和BL21（DE3）宿主菌构建工程菌之后，测序发现pet-28b质粒上lacI基因缺失了两个碱基，这与我的目的蛋白不表达有关系么？
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2013-12-09 10:19:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

574759350

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by gyesang at 2013-12-09 11:30:35
pET系列载体的基因诱导表达是受T7 RNA polymerase和LacI阻遏双重控制的，lacI缺失两个碱基，那会造成LacI基因的移码突变的，LacI就不能阻遏T7 RNA polymerase的表达，从而起不到诱导表达的作用

宿主菌和质粒上都含有lacI基因，以前我理解的是宿主菌产生的lacI阻遏蛋白与T7 RNA polymerase前的lac UV5启动子结合，而IPTG和lac I阻遏蛋白结合后失去对lac UV5的作用，因此可以启动T7 RNA聚合酶的表达，使目的蛋白表达，这样理解不对是么？lac I阻遏蛋白是质粒上的lac I基因产生的？
赞一下 回复此楼
3楼2013-12-09 12:16:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 10 个回答

gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2013-12-09 12:29:50
pET系列载体的基因诱导表达是受T7 RNA polymerase和LacI阻遏双重控制的，lacI缺失两个碱基，那会造成LacI基因的移码突变的，LacI就不能阻遏T7 RNA polymerase的表达，从而起不到诱导表达的作用
赞一下 回复此楼
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
2楼2013-12-09 11:30:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Haibara_Ai

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+1, 鼓励交流！ 2013-12-09 14:21:38
574759350: 金币+2, ★有帮助 2013-12-09 16:56:26
lacI同时抑制 T7 promoter和T7的lacUV5两个启动子
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2013-12-09 12:32:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

★ ★ ★
574759350: 金币+3, ★★★很有帮助 2013-12-09 16:56:08
引用回帖:
3楼: Originally posted by 574759350 at 2013-12-09 12:16:16
宿主菌和质粒上都含有lacI基因，以前我理解的是宿主菌产生的lacI阻遏蛋白与T7 RNA polymerase前的lac UV5启动子结合，而IPTG和lac I阻遏蛋白结合后失去对lac UV5的作用，因此可以启动T7 RNA聚合酶的表达，使目的蛋 ...

更正我上面错误的说法，
表达菌株BL21(DE3)上带有lacI基因，其表达的LacI蛋白在非诱导的条件下，既可以与T7 RNA polymerase前的lac UV5启动子后的operator O结合，也可以与pET28a载体T7启动子后的Operator O结合，从而在非诱导情况下阻遏目的基因表达
虽然pET-28a载体的LacI发生碱基缺失突变，由于细菌基因组本身仍能表达正常的LacI，所以总的来说在非诱导情况下仍能阻遏蛋白表达

这两个碱基的缺失与你的蛋白不表达无关
赞一下(1人) 回复此楼
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
5楼2013-12-09 14:35:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 10 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 一志愿华中科技大学，080502，354分求调剂 +3 守候夕阳CF 2026-03-18 3/150 2026-03-18 18:29 by 科研小拿拿
[考研] 354求调剂 +3 Tyoumou 2026-03-18 5/250 2026-03-18 16:41 by Tyoumou
[考研] 085600材料与化工 +5 安全上岸！ 2026-03-16 5/250 2026-03-18 15:33 by cmz0325
[考研] 08工科 320总分 求调剂 +5 梨花珞晚风 2026-03-17 5/250 2026-03-18 14:49 by haxia
[考博] 环境领域全国重点实验室招收博士1-2名 +3 QGZDSYS 2026-03-13 5/250 2026-03-18 11:13 by QGZDSYS
[考研] 0703化学调剂 +3 妮妮ninicgb 2026-03-17 3/150 2026-03-18 10:29 by macy2011
[考研] 277调剂 +5 自由煎饼果子 2026-03-16 6/300 2026-03-17 19:26 by 李leezz
[考研] 机械专硕325，寻找调剂院校 +3 y9999 2026-03-15 5/250 2026-03-16 19:58 by y9999
[考研] 333求调剂 +3 文思客 2026-03-16 7/350 2026-03-16 18:21 by 文思客
[考研] 321求调剂 +5 大米饭！ 2026-03-15 5/250 2026-03-16 16:33 by houyaoxu
[考研] 326求调剂 +3 mlpqaz03 2026-03-15 3/150 2026-03-16 07:33 by Iveryant
[考研] 289求调剂 +4 这么名字咋样 2026-03-14 6/300 2026-03-14 18:58 by userper
[考研] 297一志愿上交085600求调剂 +5 指尖八千里 2026-03-14 5/250 2026-03-14 17:26 by a不易
[考研] 一志愿哈工大材料324分求调剂 +5 闫旭东 2026-03-14 5/250 2026-03-14 14:53 by 木瓜膏
[考研] 297求调剂 +4 学海漂泊 2026-03-13 4/200 2026-03-14 11:51 by 热情沙漠
[考研] 学硕285求调剂 +13 Wisjxn 2026-03-12 46/2300 2026-03-14 10:33 by JourneyLucky
[考研] 304求调剂 +6 Mochaaaa 2026-03-12 7/350 2026-03-13 22:18 by 星空星月
[考研] 材料工程调剂 +9 咪咪空空 2026-03-12 9/450 2026-03-13 22:05 by 星空星月
[考研] 工科278分求调剂 +5 周慢热啊 2026-03-12 7/350 2026-03-13 15:49 by JourneyLucky
[考研] 一志愿山大07化学 332分 四六级已过 本科山东双非 求调剂！ +3 不想理你 2026-03-12 3/150 2026-03-13 14:18 by JourneyLucky
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭