2楼: Originally posted by gyesang at 2013-12-09 11:30:35
pET系列载体的基因诱导表达是受T7 RNA polymerase和LacI阻遏双重控制的，lacI缺失两个碱基，那会造成LacI基因的移码突变的，LacI就不能阻遏T7 RNA polymerase的表达，从而起不到诱导表达的作用

3楼: Originally posted by 574759350 at 2013-12-09 12:16:16
宿主菌和质粒上都含有lacI基因，以前我理解的是宿主菌产生的lacI阻遏蛋白与T7 RNA polymerase前的lac UV5启动子结合，而IPTG和lac I阻遏蛋白结合后失去对lac UV5的作用，因此可以启动T7 RNA聚合酶的表达，使目的蛋 ...

5楼: Originally posted by gyesang at 2013-12-09 14:35:21
更正我上面错误的说法，
表达菌株BL21(DE3)上带有lacI基因，其表达的LacI蛋白在非诱导的条件下，既可以与T7 RNA polymerase前的lac UV5启动子后的operator O结合，也可以与pET28a载体T7启动子后的Operator O结合， ...

6楼: Originally posted by Haibara_Ai at 2013-12-10 01:08:53
"由于细菌基因组本身仍能表达正常的LacI，所以总的来说在非诱导情况下仍能阻遏蛋白表达"

这个如果genome里面是lacIwt,表达量非常低，抑制很差（大概能抑制个20%就不错了），不用指望，如果是lacIq，还 ...

7楼: Originally posted by gyesang at 2013-12-10 15:00:37
BL21(DE3)

F– ompT gal dcm lon hsdSB(rB- mB-) λ(DE3 )

    an E. coli B strain with DE3, a λ prophage carrying the T7 RNA polymerase gene and lacIq
    Transformed plasmids containing T7 pro ...

8楼: Originally posted by Haibara_Ai at 2013-12-11 03:01:35
加上de3里面的lacI就是2copy的wtlacI，是完全不够抑制的，
wtlacI大概要10-20copy左右才能有效抑制 Plac类promoter的活性...

9楼: Originally posted by gyesang at 2013-12-11 03:24:28
BL21（DE3）an E. coli B strain with DE3, a λ prophage carrying the T7 RNA polymerase gene and lacIq，
你认为lacIq是wt的？...