| 查看: 1290 | 回复: 3 | |||
肥猫p版主
|
[求助]
如何在丝状真菌中表达如何蛋白 已有1人参与
|
|
大家好，说一下我要做的实验。 导师让我给丝状真菌的一个ORF有6kb的大基因挂上gfp或者mcherry之类的荧光标签，使之成为融合蛋白。 我这几天查文献，发现大家做融合蛋白基本都是将两个基因的ORF连接起来，然后在表达载体上进行表达。 但是这个丝状真菌没有表达质粒啊，只能进行基因组整合，所以我就不知道该怎么做了。 之前我是这么做的，通过2次重叠pcr，构建成这样的序列：上游同源片段+第一个基因的ORF（去终止密码子）+第二个基因的ORF+构巢曲霉的终止子TtrpC+抗性筛选标记HYGB+下游同源片段。 通过农杆菌侵染，上下游片段与丝状真菌的基因组进行同源重组双交换，确实筛选到了基因型正确的重组子。当时我第二个基因选的是gfp，但是不能发荧光，够来发现不能发光的原因是第一个基因不转录了！我并没有对第一个基因的启动子和整个ORF进行任何操作啊，只是在第一个基因的ORF后面加了gfp的ORF，然后再换了个终止子而已。我感觉只有更换终止子也会影响这个基因的转录，可以解释了。 那么我现在应该怎么做呢？怎么在不影响第一个基因的启动子、ORF和终止子的情况下，将gfp与它进行融合表达呢？那我的筛选标记放那啊？ 希望能得到大家的宝贵意见，谢谢大家！ |
回复此楼» 猜你喜欢
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有240人回复
-
纳米粒度分析
已经有3人回复
-
林科院林化所招收材料与化工专业硕士，坐标南京
已经有0人回复
-
留学--博士招生
已经有16人回复
-
化学工程，本211，求调剂，ab区不限
已经有4人回复
-
湖北师范大学招调剂啦
已经有6人回复
-
邵阳学院食品与化学工程学院硕士调剂
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 菌株老是不纯怎么办
已经有11人回复
- 大肠杆菌怎么没有了
已经有20人回复
- 关于启动子融合载体的构建
已经有3人回复
- 怎么使大肠杆菌产生更多的臭味
已经有9人回复
- 如何有效降低丝状真菌产抗生素过程中极易染菌的问题？
已经有12人回复
- 怎样测定真菌菌丝体的浓度或含量？
已经有17人回复
- 大肠杆菌和丝状真菌长到一起了，怎么有效的分离啊
已经有6人回复
- 菌体如何破碎？求助
已经有10人回复
- 丝状真菌如何斜面接种？
已经有8人回复
- 丝状真菌孢子染色方法
已经有8人回复
- 转化真菌后，怎么鉴定转化子？目的基因是从该真菌克隆出来的
已经有5人回复
- 外生菌根真菌研究进展 综述
已经有6人回复
- 怎么判断目的基因序列中是否含有信号肽~~
已经有11人回复
- 丝状真菌菌丝体破碎细胞壁，不要胞内酶，求助最简单的实验方法。。。
已经有18人回复
- 【求助/交流】表达载体pCAMBIA1304表达顺序看不懂
已经有12人回复
- 如何寻找基因的启动子和终止子？
已经有3人回复
- 蛋白酶基因表达，用的Bacillus subtilis系统，但总是表达不出，求高人指点……
已经有19人回复
- 外源基因在酵母中表达
已经有7人回复
- 丝状真菌提取总DNA问题
已经有14人回复
- 丝状真菌的基因敲除
已经有7人回复
- 【求助/交流】融合蛋白linker的选择
已经有7人回复
- 【求助/交流】急！关于外源基因在丝状真菌中的融合表达
已经有8人回复
- 【求助/交流】请问，丝状真菌除了潮霉素之外，草胺膦等可以作为筛选标记吗？
已经有10人回复
2楼2013-12-03 19:53:47
junqing
版主
- 应助: 7 (幼儿园)
- 金币: 1693.2
- 散金: 311
- 红花: 4
- 沙发: 1
- 帖子: 743
- 在线: 257.9小时
- 虫号: 1651193
- 注册: 2012-02-28
- 性别: GG
- 专业: 微生物学
3楼2014-04-19 22:32:22
4楼2015-05-29 13:28:42
10