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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » western实验问题
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瞬间流星

新虫 (初入文坛)

[求助] western实验问题

大家好，本人做western已有几个月的时间，平时做的都是细胞的蛋白，最近做的骨骼肌蛋白分子量170-185，一直没有做出来，希望高手帮忙解决一下！平时我做的分子量最小20，最大是90，电泳条件是50V、35mA，转膜是280mA，但是这个分子量太大，一直没找到好的解决办法，望大家鼎力相助啊！谢了！
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1楼2013-11-20 17:35:07
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kinda_

铁虫 (小有名气)
PAGE胶是多大浓度的？先保证这个蛋白跑到分离胶上，然后再考虑转膜。
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2楼2013-11-20 18:36:32
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forensic110

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
amisking: 金币+3, 鼓励新虫发帖交流，欢迎常来！ 2013-11-20 19:14:36
胶是10%，转膜时间，一般用0.13A，45分钟230kd可以出来。（供参考）
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3楼2013-11-20 18:46:31
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瞬间流星

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by kinda_ at 2013-11-20 18:36:32
PAGE胶是多大浓度的？先保证这个蛋白跑到分离胶上，然后再考虑转膜。

6%的胶
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4楼2013-11-20 19:38:09
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瞬间流星

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by forensic110 at 2013-11-20 18:46:31
胶是10%，转膜时间，一般用0.13A，45分钟230kd可以出来。（供参考）

谢谢  回头我试试！
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5楼2013-11-20 20:01:09
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lhs521521

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-11-22 12:58:22
个人认为，5%浓缩胶，8-10%的分离胶；260mA，1.5h；仅供参考！
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寻找真正的自我！
6楼2013-11-21 09:33:55
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daibingling

铁虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-11-22 12:58:13
我的实验，10%分离胶，230kd，200mA转膜3小时，没问题
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7楼2013-11-21 10:19:27
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zhsmallsnow

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-11-22 12:58:07
我的实验，8%分离胶，180kd，60v恒转转膜2小时，希望有帮助
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8楼2013-11-21 16:58:43
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瞬间流星

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by lhs521521 at 2013-11-21 09:33:55
个人认为，5%浓缩胶，8-10%的分离胶；260mA，1.5h；仅供参考！

谢谢  尝试中！
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9楼2013-11-26 14:42:46
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