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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 新药研发 » 资料求助 » 依利特C18色谱柱问题
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求高手指点

金虫 (小有名气)

[求助] 依利特C18色谱柱问题

本人最近在使用依利特C18ODS 5微米的色谱柱用于分析   头孢类物质。   分析的样品里有头孢氨苄、7-ADCA、苯甘氨酸甲酯、苯甘氨酸四种物质。      流动相使用10mMPH7.0的磷酸盐缓冲液70%：甲醇30%                 这样分析使用会出现问题？      刚开始峰形很好，但是打了几次就出现了肩峰。我怀疑可能是样品没有过膜。柱子是新买的。   无奈之下，我只能反向使用柱子，并且样品都过膜，刚开始使用峰形很好，但是今天使用流动相时，每进一针样品，柱压就升高一点，最后柱压达到了190bar，，，，之后用10%甲醇洗的时候柱压上升到250，后面逐渐降低到160，求解释原因，是柱子不适合分析我这个样品还是流动相不行？？？或者是前面没有过膜的样品污染了柱子，反向打和洗的时候再次污染了？？？？  求解释。。。。
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1楼 2013-11-20 10:07:09
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

tuange

木虫 (著名写手)

第三军团首席执行官

【答案】应助回帖

干嘛那么计较柱压呢，冲洗液粘度不同柱压自然不同，只要不是突然升高就好？为啥不用纯水冲呢，C18柱子用过缓冲液后用水冲是最好的选择

还以为你是不知道怎么散金币呢，其实金币都是浮云，是一种感谢的方式，看哥散的金币比我现有的还多
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人寿百年尔，谁得死其所。有生当醉饮，借月照华庭。
28楼2013-12-01 14:53:40
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henryyelei

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你把你的盐和甲醇拿个烧杯，在外面混合一下，如果有盐析出的话，可能是流动相的问题，你进这么几针，不会是样品问题，多半是流动相的问题
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6楼2013-11-20 17:39:01
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ririwowo

禁虫 (正式写手)
感谢参与，应助指数 +1
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19楼2013-11-22 13:21:50
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普通回帖

求高手指点

金虫 (小有名气)
最后甲醇保存时柱压正常
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2楼2013-11-20 10:19:08
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韩涵~

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
河边的芦苇: 金币+1, 感谢交流 2013-11-20 17:47:06
新柱子要活化，梯度洗脱，不知你活化了没有。。再就是柱子是有方向的。。不能逆向冲柱子，要不柱子就废了。。。至于你分析的这几种物质，由于我是学中药的就不能给你什么建议了。。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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3楼2013-11-20 15:35:26
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韩涵~

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

还有啊~流动相含有水相柱压相对就高，大约不过20左右。。。醇有机相的柱压低，5以下。。。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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4楼2013-11-20 15:38:47
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tuange

木虫 (著名写手)

第三军团首席执行官

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
样品用什么溶解稀释的？换流动相之前对柱子咋处理的？
一般情况下依利特柱子比较耐用的。
流动相组分是混合后过滤了的吧？不进样品只走流动相时柱压会升高么？
依利特C18柱可以反着用的，没事的，不过要注意不要污染检测器。
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人寿百年尔，谁得死其所。有生当醉饮，借月照华庭。
5楼2013-11-20 17:20:18
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求高手指点

金虫 (小有名气)
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5楼: Originally posted by tuange at 2013-11-20 17:20:18
样品用什么溶解稀释的？换流动相之前对柱子咋处理的？
一般情况下依利特柱子比较耐用的。
流动相组分是混合后过滤了的吧？不进样品只走流动相时柱压会升高么？
依利特C18柱可以反着用的，没事的，不过要注意不要 ...

样品是直接用水溶解的，过膜后打样。    我换流动相前柱子跑的甲醇，没有过渡。      流动相时分开抽滤的，因为仪器就是可以使甲醇和盐按比例流的，流动相比例是参照文献的，只是盐的浓度比文献的20mM低。     现在出现问题就是说甲醇洗柱子柱压正常，换10%甲醇柱压就偏高了。
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7楼2013-11-21 10:11:18
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求高手指点

金虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by henryyelei at 2013-11-20 17:39:01
你把你的盐和甲醇拿个烧杯，在外面混合一下，如果有盐析出的话，可能是流动相的问题，你进这么几针，不会是样品问题，多半是流动相的问题

流动相时参照文献的，应该不会有问题吧
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8楼2013-11-21 10:11:40
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tuange

木虫 (著名写手)

第三军团首席执行官
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7楼: Originally posted by 求高手指点 at 2013-11-21 10:11:18
样品是直接用水溶解的，过膜后打样。    我换流动相前柱子跑的甲醇，没有过渡。      流动相时分开抽滤的，因为仪器就是可以使甲醇和盐按比例流的，流动相比例是参照文献的，只是盐的浓度比文献的20mM低。     现在 ...

样品用水溶解没问题
你时刚开始做液相吧，以后有问题相互学习探讨？换流动相前不能用甲醇，要用水、5%~30%甲醇水都问题不大，记住：可以用纯水，没问题的！！！！！
流动相为什么分开抽滤？？混合后可能会有盐析出。
你现在柱子中应该已经有盐析出了，柱子都快废了，现在用纯水0.2的流速冲过夜，再试一下。
在操作中犯了两个比较严重的错误。
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人寿百年尔，谁得死其所。有生当醉饮，借月照华庭。
9楼2013-11-21 10:21:38
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tuange

木虫 (著名写手)

第三军团首席执行官

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
求高手指点: 金币+5, ★★★很有帮助, 先混合流动相打每一针就没有升高了，但是压力还是有点高，用10%甲醇和甲醇轮流洗之后慢慢有点下降了，应该问题不大了吧 2013-11-29 18:59:08
引用回帖:
7楼: Originally posted by 求高手指点 at 2013-11-21 10:11:18
样品是直接用水溶解的，过膜后打样。    我换流动相前柱子跑的甲醇，没有过渡。      流动相时分开抽滤的，因为仪器就是可以使甲醇和盐按比例流的，流动相比例是参照文献的，只是盐的浓度比文献的20mM低。     现在 ...

甲醇和缓冲盐混合溶液产生气泡也会析出盐，最后混合后过滤。
再有，缓冲盐比例较高，所以换流动相前柱子里面不能使甲醇，最好用水。
每个色谱条件都是不一样的
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10楼2013-11-21 10:25:27
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