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求高手指点

金虫 (小有名气)

[求助] 依利特C18色谱柱问题

本人最近在使用依利特C18ODS 5微米的色谱柱用于分析   头孢类物质。   分析的样品里有头孢氨苄、7-ADCA、苯甘氨酸甲酯、苯甘氨酸四种物质。      流动相使用10mMPH7.0的磷酸盐缓冲液70%:甲醇30%                 这样分析使用会出现问题?      刚开始峰形很好,但是打了几次就出现了肩峰。我怀疑可能是样品没有过膜。柱子是新买的。   无奈之下,我只能反向使用柱子,并且样品都过膜,刚开始使用峰形很好,但是今天使用流动相时,每进一针样品,柱压就升高一点,最后柱压达到了190bar,,,,之后用10%甲醇洗的时候柱压上升到250,后面逐渐降低到160,求解释原因,是柱子不适合分析我这个样品还是流动相不行???或者是前面没有过膜的样品污染了柱子,反向打和洗的时候再次污染了????  求解释。。。。
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韩涵~

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

还有啊~流动相含有水相柱压相对就高,大约不过20左右。。。醇有机相的柱压低,5以下。。。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
4楼2013-11-20 15:38:47
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求高手指点

金虫 (小有名气)

最后甲醇保存时柱压正常
2楼2013-11-20 10:19:08
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韩涵~

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
河边的芦苇: 金币+1, 感谢交流 2013-11-20 17:47:06
新柱子要活化,梯度洗脱,不知你活化了没有。。再就是柱子是有方向的。。不能逆向冲柱子,要不柱子就废了。。。至于你分析的这几种物质,由于我是学中药的就不能给你什么建议了。。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
3楼2013-11-20 15:35:26
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tuange

木虫 (著名写手)

第三军团首席执行官

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
样品用什么溶解稀释的?换流动相之前对柱子咋处理的?
一般情况下依利特柱子比较耐用的。
流动相组分是混合后过滤了的吧?不进样品只走流动相时柱压会升高么?
依利特C18柱可以反着用的,没事的,不过要注意不要污染检测器。
人寿百年尔,谁得死其所。有生当醉饮,借月照华庭。
5楼2013-11-20 17:20:18
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