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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 新药研发 » 资料求助 » 依利特C18色谱柱问题
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求高手指点

金虫 (小有名气)

[求助] 依利特C18色谱柱问题

本人最近在使用依利特C18ODS 5微米的色谱柱用于分析   头孢类物质。   分析的样品里有头孢氨苄、7-ADCA、苯甘氨酸甲酯、苯甘氨酸四种物质。      流动相使用10mMPH7.0的磷酸盐缓冲液70%：甲醇30%                 这样分析使用会出现问题？      刚开始峰形很好，但是打了几次就出现了肩峰。我怀疑可能是样品没有过膜。柱子是新买的。   无奈之下，我只能反向使用柱子，并且样品都过膜，刚开始使用峰形很好，但是今天使用流动相时，每进一针样品，柱压就升高一点，最后柱压达到了190bar，，，，之后用10%甲醇洗的时候柱压上升到250，后面逐渐降低到160，求解释原因，是柱子不适合分析我这个样品还是流动相不行？？？或者是前面没有过膜的样品污染了柱子，反向打和洗的时候再次污染了？？？？  求解释。。。。
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1楼 2013-11-20 10:07:09
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henryyelei

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你把你的盐和甲醇拿个烧杯，在外面混合一下，如果有盐析出的话，可能是流动相的问题，你进这么几针，不会是样品问题，多半是流动相的问题
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6楼2013-11-20 17:39:01
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求高手指点

金虫 (小有名气)
最后甲醇保存时柱压正常
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2楼2013-11-20 10:19:08
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韩涵~

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
河边的芦苇: 金币+1, 感谢交流 2013-11-20 17:47:06
新柱子要活化，梯度洗脱，不知你活化了没有。。再就是柱子是有方向的。。不能逆向冲柱子，要不柱子就废了。。。至于你分析的这几种物质，由于我是学中药的就不能给你什么建议了。。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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3楼2013-11-20 15:35:26
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韩涵~

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

还有啊~流动相含有水相柱压相对就高，大约不过20左右。。。醇有机相的柱压低，5以下。。。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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4楼2013-11-20 15:38:47
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