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求高手指点

金虫 (小有名气)

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[求助] 依利特C18色谱柱问题

本人最近在使用依利特C18ODS 5微米的色谱柱用于分析头孢类物质。分析的样品里有头孢氨苄、7-ADCA、苯甘氨酸甲酯、苯甘氨酸四种物质。流动相使用10mMPH7.0的磷酸盐缓冲液70%：甲醇30% 这样分析使用会出现问题？刚开始峰形很好，但是打了几次就出现了肩峰。我怀疑可能是样品没有过膜。柱子是新买的。无奈之下，我只能反向使用柱子，并且样品都过膜，刚开始使用峰形很好，但是今天使用流动相时，每进一针样品，柱压就升高一点，最后柱压达到了190bar，，，，之后用10%甲醇洗的时候柱压上升到250，后面逐渐降低到160，求解释原因，是柱子不适合分析我这个样品还是流动相不行？？？或者是前面没有过膜的样品污染了柱子，反向打和洗的时候再次污染了？？？？求解释。。。。

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1楼 2013-11-20 10:07:09

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tuange

木虫 (著名写手)

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引用回帖:

7楼: Originally posted by 求高手指点 at 2013-11-21 10:11:18
样品是直接用水溶解的，过膜后打样。我换流动相前柱子跑的甲醇，没有过渡。流动相时分开抽滤的，因为仪器就是可以使甲醇和盐按比例流的，流动相比例是参照文献的，只是盐的浓度比文献的20mM低。现在 ...

样品用水溶解没问题
你时刚开始做液相吧，以后有问题相互学习探讨？换流动相前不能用甲醇，要用水、5%~30%甲醇水都问题不大，记住：可以用纯水，没问题的！！！！！
流动相为什么分开抽滤？？混合后可能会有盐析出。
你现在柱子中应该已经有盐析出了，柱子都快废了，现在用纯水0.2的流速冲过夜，再试一下。
在操作中犯了两个比较严重的错误。