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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 细胞pull down实验，蛋白电泳上了三个样，只有第一个出现，怎么才能让后两个出现呢？
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浩子jerry

金虫 (正式写手)

(ˇˍˇ） 想～

[求助] 细胞pull down实验，蛋白电泳上了三个样，只有第一个出现，怎么才能让后两个出现呢？

小弟在做细胞的pull down实验，提取了3次蛋白，跑电泳，然后考染，第一次出来了，后两次木有，而且阴性对照也没出现，是pull down 时候没提出来么？做pull down 时候要注意哪些啊？请各位大侠多多指教啊
细胞pull down实验，蛋白电泳上了三个样，只有第一个出现，怎么才能让后两个出现呢？
20131025考染胶.gif


细胞pull down实验，蛋白电泳上了三个样，只有第一个出现，怎么才能让后两个出现呢？-1
20131101-2.gif
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嘎嘎
1楼 2013-11-04 18:09:41
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昙花巫婆

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-11-05 11:51:48
浩子jerry: 金币+3, ★★★很有帮助 2013-11-05 18:38:53
你可以增加上样量试一下，还有就是你可以用western bolt做一下，有可能是因为蛋白量太少，染色不行，但是做western的化蛋白量很少抗体也能检测到。
做PULL DOWN应该注意的主要就是两个蛋白的结合时间，不要过短，过短的化结合的不彻底，也不要太长，太长的话越容易降解。
暂时就想到这么多，希望对你的实验有帮助。
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我是女博士，但我并不可怕！
2楼2013-11-04 21:16:34
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浩子jerry

金虫 (正式写手)

(ˇˍˇ） 想～
引用回帖:
2楼: Originally posted by 昙花巫婆 at 2013-11-04 21:16:34
你可以增加上样量试一下，还有就是你可以用western bolt做一下，有可能是因为蛋白量太少，染色不行，但是做western的化蛋白量很少抗体也能检测到。
做PULL DOWN应该注意的主要就是两个蛋白的结合时间，不要过短，过 ...

嗯，好的 ，谢谢，今天就做了western，晚上压片子
我的后两个不明显，可能降解了，我下次准备测个蛋白浓度试试，估计可以看出来，谢谢
赞一下 回复此楼
嘎嘎
3楼2013-11-05 18:37:44
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