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草影花飘

新虫 (小有名气)

[交流] 【求助】NF-κB用什么方法测比较好?已有9人参与

我是一个药理学硕士生,想测大鼠腹主动脉上的NF-κB指标,我看很多国内文献上都是用免疫组化的方法测的,国外的文献基本上都是用Western Blotting测的,我听人说免疫组化是半定量的方法,染色出来的切片效果会不太好,而Western Blotting是定量方法,但价格昂贵,老板不让用,请问我应该选什么方法比较适合呢?
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xhjggl

木虫 (正式写手)


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可以用上海生工的试剂盒,再做WESTERN BLOT

细胞核蛋白/浆蛋白抽提试剂盒
Nuclear and Cytoplasmic Protein Extraction Kit       
产品说明:本试剂盒用于从哺乳动物组织和培养细胞中提取核蛋白和胞质蛋白,提取制备过程简便。制备的核蛋白和胞浆蛋白能保持天然活性,并且纯度较高。提取的蛋白可用于进一步的转录因子活性分析、凝胶阻滞实验(gel shift assay)、免疫共沉淀、Western Blotting、酶活性测定等后续蛋白质研究,可以每次从1×107个培养细胞或200mg 组织中提取所需要的蛋白质,可以使用50次。储存条件:2-~8℃。
产品特点:
1.最大限度保持蛋白质活性,可以用于EMSA,Pull down,Enzyme activity assay等实验;
2.整个操作过程只需要一个小时左右;
3.即可以用于培养细胞(50x107个),有可以用于动物组织(50x200mg)蛋白质的提取;
4.避免蛋白酶对蛋白质的降解,保持蛋白质的完整性和天然活性;
5.可以同时处理多个样品。
编号        包装        价格        产地
7楼2011-04-01 21:40:39
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pxhcooh

金虫 (正式写手)

像类似的转录因子,用wb都不好做的,还是用ELISA
2楼2011-03-11 19:16:54
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草影花飘

新虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by pxhcooh at 2011-03-11 19:16:54:
像类似的转录因子,用wb都不好做的,还是用ELISA

那用ELISA做的话,需要先进行核蛋白提取的步骤吗
3楼2011-03-14 22:49:33
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pier_829

木虫 (小有名气)


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NF-kappaB 最好的方法是EMSA,这是最经典的,因为可以测出NF-kappaB的活性
现在也有很多的文献用的是western-blot的方法,但是因为NF-kappaB是一个核转录因子,所以需要分别测细胞质蛋白和细胞核蛋白中的表达量
至于elisa吧,NF-kappaB的盒子现在也有了,但是我自己没做过,不好说,但是肯定价格比较贵
免疫组化的话结果比较主观,但是阳性结果也不是那么好做出来的
4楼2011-03-29 14:24:04
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dukemiles

木虫 (小有名气)


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NF-kB是多种亚基构成的,通常是要western检测的。核转录活性调节的话需要EMSA。组化作出来的结果,越来越不被接受了,除非楼主有啥重要发现,多方面论证的时候,建议做confocal之类的作为形态学证据。
''theperfectsolutionistheimperfection''
5楼2011-04-01 13:11:32
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若霖儿

银虫 (小有名气)


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组化就定个性 要定量还是WESTERN吧
6楼2011-04-01 16:28:05
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faith_hao

铜虫 (小有名气)


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引用回帖:
7楼: Originally posted by xhjggl at 2011-04-01 21:40:39
可以用上海生工的试剂盒,再做WESTERN BLOT

细胞核蛋白/浆蛋白抽提试剂盒
Nuclear and Cytoplasmic Protein Extraction Kit       
产品说明:本试剂盒用于从哺乳动物组织和培养细胞中提取核蛋白和胞质蛋白,提取制备 ...

提取的核蛋白可以做ELISA吗?ELISA检测转录因子的具体步骤跟一般测上清有什么区别?
我未曾见过一个早起、勤奋、谨慎、诚实的人抱怨命运不好;良好的品格,优良的习惯,坚强的意志,是不会被假设所谓的命运击败的。——《富兰克林自传》
8楼2013-05-06 09:11:39
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faith_hao

铜虫 (小有名气)


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2楼: Originally posted by pxhcooh at 2011-03-11 19:16:54
像类似的转录因子,用wb都不好做的,还是用ELISA

同问:ELISA能检测核蛋白的量吗?需要核蛋白提取吗?上清不能检测吗?
我未曾见过一个早起、勤奋、谨慎、诚实的人抱怨命运不好;良好的品格,优良的习惯,坚强的意志,是不会被假设所谓的命运击败的。——《富兰克林自传》
9楼2013-05-06 09:21:15
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kk1424

主管区长 (著名写手)

中药研究者

优秀区长优秀区长优秀版主优秀版主


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
很贵么?现在W B的检测手法很常见吧,只要你们有设备,试剂又不是很贵。5000以下可以拿下,不过那个电泳设备有点贵,,,,
药理毒理
10楼2013-05-06 22:06:56
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