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草影花飘

新虫 (小有名气)

[交流] 【求助】NF-κB用什么方法测比较好?已有9人参与

我是一个药理学硕士生,想测大鼠腹主动脉上的NF-κB指标,我看很多国内文献上都是用免疫组化的方法测的,国外的文献基本上都是用Western Blotting测的,我听人说免疫组化是半定量的方法,染色出来的切片效果会不太好,而Western Blotting是定量方法,但价格昂贵,老板不让用,请问我应该选什么方法比较适合呢?
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草影花飘

新虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by pxhcooh at 2011-03-11 19:16:54:
像类似的转录因子,用wb都不好做的,还是用ELISA

那用ELISA做的话,需要先进行核蛋白提取的步骤吗
3楼2011-03-14 22:49:33
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pxhcooh

金虫 (正式写手)

像类似的转录因子,用wb都不好做的,还是用ELISA
2楼2011-03-11 19:16:54
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pier_829

木虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
NF-kappaB 最好的方法是EMSA,这是最经典的,因为可以测出NF-kappaB的活性
现在也有很多的文献用的是western-blot的方法,但是因为NF-kappaB是一个核转录因子,所以需要分别测细胞质蛋白和细胞核蛋白中的表达量
至于elisa吧,NF-kappaB的盒子现在也有了,但是我自己没做过,不好说,但是肯定价格比较贵
免疫组化的话结果比较主观,但是阳性结果也不是那么好做出来的
4楼2011-03-29 14:24:04
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dukemiles

木虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
NF-kB是多种亚基构成的,通常是要western检测的。核转录活性调节的话需要EMSA。组化作出来的结果,越来越不被接受了,除非楼主有啥重要发现,多方面论证的时候,建议做confocal之类的作为形态学证据。
''theperfectsolutionistheimperfection''
5楼2011-04-01 13:11:32
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