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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 药学 » 药理学 » 【求助】NF-κB用什么方法测比较好？
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草影花飘

新虫 (小有名气)

[交流] 【求助】NF-κB用什么方法测比较好？ 已有9人参与

我是一个药理学硕士生，想测大鼠腹主动脉上的NF-κB指标，我看很多国内文献上都是用免疫组化的方法测的，国外的文献基本上都是用Western Blotting测的，我听人说免疫组化是半定量的方法，染色出来的切片效果会不太好，而Western Blotting是定量方法，但价格昂贵，老板不让用，请问我应该选什么方法比较适合呢？
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1楼 2011-03-10 18:47:16
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dukemiles

木虫 (小有名气)
★
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NF-kB是多种亚基构成的，通常是要western检测的。核转录活性调节的话需要EMSA。组化作出来的结果，越来越不被接受了，除非楼主有啥重要发现，多方面论证的时候，建议做confocal之类的作为形态学证据。
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''theperfectsolutionistheimperfection''
5楼2011-04-01 13:11:32
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pxhcooh

金虫 (正式写手)
像类似的转录因子，用wb都不好做的，还是用ELISA
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2楼2011-03-11 19:16:54
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草影花飘

新虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by pxhcooh at 2011-03-11 19:16:54:
像类似的转录因子，用wb都不好做的，还是用ELISA

那用ELISA做的话，需要先进行核蛋白提取的步骤吗
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3楼2011-03-14 22:49:33
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pier_829

木虫 (小有名气)
★
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NF-kappaB 最好的方法是EMSA，这是最经典的，因为可以测出NF-kappaB的活性
现在也有很多的文献用的是western-blot的方法，但是因为NF-kappaB是一个核转录因子，所以需要分别测细胞质蛋白和细胞核蛋白中的表达量
至于elisa吧，NF-kappaB的盒子现在也有了，但是我自己没做过，不好说，但是肯定价格比较贵
免疫组化的话结果比较主观，但是阳性结果也不是那么好做出来的
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4楼2011-03-29 14:24:04
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