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草影花飘

新虫 (小有名气)

[交流] 【求助】NF-κB用什么方法测比较好? 已有9人参与

我是一个药理学硕士生,想测大鼠腹主动脉上的NF-κB指标,我看很多国内文献上都是用免疫组化的方法测的,国外的文献基本上都是用Western Blotting测的,我听人说免疫组化是半定量的方法,染色出来的切片效果会不太好,而Western Blotting是定量方法,但价格昂贵,老板不让用,请问我应该选什么方法比较适合呢?
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xhjggl

木虫 (正式写手)

★
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可以用上海生工的试剂盒,再做WESTERN BLOT

细胞核蛋白/浆蛋白抽提试剂盒
Nuclear and Cytoplasmic Protein Extraction Kit       
产品说明:本试剂盒用于从哺乳动物组织和培养细胞中提取核蛋白和胞质蛋白,提取制备过程简便。制备的核蛋白和胞浆蛋白能保持天然活性,并且纯度较高。提取的蛋白可用于进一步的转录因子活性分析、凝胶阻滞实验(gel shift assay)、免疫共沉淀、Western Blotting、酶活性测定等后续蛋白质研究,可以每次从1×107个培养细胞或200mg 组织中提取所需要的蛋白质,可以使用50次。储存条件:2-~8℃。
产品特点:
1.最大限度保持蛋白质活性,可以用于EMSA,Pull down,Enzyme activity assay等实验;
2.整个操作过程只需要一个小时左右;
3.即可以用于培养细胞(50x107个),有可以用于动物组织(50x200mg)蛋白质的提取;
4.避免蛋白酶对蛋白质的降解,保持蛋白质的完整性和天然活性;
5.可以同时处理多个样品。
编号        包装        价格        产地
7楼2011-04-01 21:40:39
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pxhcooh

金虫 (正式写手)

像类似的转录因子,用wb都不好做的,还是用ELISA
2楼2011-03-11 19:16:54
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草影花飘

新虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by pxhcooh at 2011-03-11 19:16:54:
像类似的转录因子,用wb都不好做的,还是用ELISA

那用ELISA做的话,需要先进行核蛋白提取的步骤吗
3楼2011-03-14 22:49:33
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pier_829

木虫 (小有名气)

★
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NF-kappaB 最好的方法是EMSA,这是最经典的,因为可以测出NF-kappaB的活性
现在也有很多的文献用的是western-blot的方法,但是因为NF-kappaB是一个核转录因子,所以需要分别测细胞质蛋白和细胞核蛋白中的表达量
至于elisa吧,NF-kappaB的盒子现在也有了,但是我自己没做过,不好说,但是肯定价格比较贵
免疫组化的话结果比较主观,但是阳性结果也不是那么好做出来的
4楼2011-03-29 14:24:04
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