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浩子jerry

金虫 (正式写手)

(ˇˍˇ) 想~

[求助] 细胞pull down实验,蛋白电泳上了三个样,只有第一个出现,怎么才能让后两个出现呢?

小弟在做细胞的pull down实验,提取了3次蛋白,跑电泳,然后考染,第一次出来了,后两次木有,而且阴性对照也没出现,是pull down 时候没提出来么?做pull down 时候要注意哪些啊?请各位大侠多多指教啊
细胞pull down实验,蛋白电泳上了三个样,只有第一个出现,怎么才能让后两个出现呢?
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细胞pull down实验,蛋白电泳上了三个样,只有第一个出现,怎么才能让后两个出现呢?-1
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嘎嘎
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昙花巫婆

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流! 2013-11-05 11:51:48
浩子jerry: 金币+3, ★★★很有帮助 2013-11-05 18:38:53
你可以增加上样量试一下,还有就是你可以用western bolt做一下,有可能是因为蛋白量太少,染色不行,但是做western的化蛋白量很少抗体也能检测到。
做PULL DOWN应该注意的主要就是两个蛋白的结合时间,不要过短,过短的化结合的不彻底,也不要太长,太长的话越容易降解。
暂时就想到这么多,希望对你的实验有帮助。
我是女博士,但我并不可怕!
2楼2013-11-04 21:16:34
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浩子jerry

金虫 (正式写手)

(ˇˍˇ) 想~

引用回帖:
2楼: Originally posted by 昙花巫婆 at 2013-11-04 21:16:34
你可以增加上样量试一下,还有就是你可以用western bolt做一下,有可能是因为蛋白量太少,染色不行,但是做western的化蛋白量很少抗体也能检测到。
做PULL DOWN应该注意的主要就是两个蛋白的结合时间,不要过短,过 ...

嗯,好的 ,谢谢,今天就做了western,晚上压片子
我的后两个不明显,可能降解了,我下次准备测个蛋白浓度试试,估计可以看出来,谢谢
嘎嘎
3楼2013-11-05 18:37:44
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