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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 黑曲霉原生质体制作只见断裂菌丝而无原生质体
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yinxian

新虫 (著名写手)

[求助] 黑曲霉原生质体制作只见断裂菌丝而无原生质体已有1人参与

做了几次黑曲霉原生质体都没有成功，着实郁闷。
在ME液体培养基里接种孢子，培养16小时收集菌球。试了裂解酶、蜗牛酶、纤维素酶的混合液，用1.0M和1.2M山梨醇做渗透压稳定剂，100rpm裂解2-3小时，培养基里有很多裂解下来的长条菌丝，但是看不到圆圆的原生质体。酶解4-5小时，菌丝被裂解得很短了，还是没有原生质体。
请教有经验的大侠，是不是如果渗透压合适，只要菌丝断裂，断裂处就应该释放原生质体？我的实验是酶的用量的问题还是渗透压的问题？
我也看了论坛的帖子，试了一下研磨菌球再制作原生质体，可是研磨后孢子也分散在培养基里，即便有原生质体形成，也无法将两者区分。
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1楼2013-10-30 11:02:54
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yinxian

新虫 (著名写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 绛洞花王 at 2014-02-25 17:38:51
请问一下：您用的山梨醇稳定剂最终选择什么浓度呀？还有您用的酶浓度比是什么浓度比呀？？非常感谢！！^_^

1M 山梨醇，酶用了溶壁酶、几丁质酶、纤维素酶。
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4楼2014-02-27 15:19:22
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yinxian

新虫 (著名写手)
问题已解决，调整酶浓度配比。圆嘟嘟的原生质体，很可爱啊。
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2楼2013-11-01 10:26:38
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绛洞花王

铜虫 (初入文坛)
请问一下：您用的山梨醇稳定剂最终选择什么浓度呀？还有您用的酶浓度比是什么浓度比呀？？非常感谢！！^_^
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学无止境！
3楼2014-02-25 17:38:51
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绛洞花王

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by yinxian at 2014-02-27 15:19:22
1M 山梨醇，酶用了溶壁酶、几丁质酶、纤维素酶。...

非常感谢！！^_^
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学无止境！
5楼2014-02-28 08:10:56
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