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偶像的黄昏yy铜虫 (小有名气)
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求教关于DTNB！！！ 已有3人参与
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| 测二硫键时，DTNB难溶于水，加热后依然难溶，请问有哪位高手做过这个实验，帮忙教一下 |
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【答案】应助回帖
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我也要做二硫键和巯基的测定，今天第一次配DTNB，是用ph8 的tris-甘氨酸直接稀释定容的，发现DTNB有少量不溶，请教了下侧过巯基的同学，他们说是把缓冲液的各种所需试剂和DTNB一起溶解溶解到离定容还剩一点体积的时候，再调节ph至8,再转移到容量瓶定容。 然后我就做了个试验，把DTNB溶于少量ph8上述缓冲液，发现pH 下降的蛮厉害的，所以我猜是因为这个原因，我用ph8的tris-甘氨酸缓冲液配dtnb才没完全溶解。 最后，我用适量ph8的tris-甘氨酸缓冲液悬浮DTNB，再用氢氧化钠调节pH至8，最后用ph8的tris-甘氨酸缓冲液定容。 第一次配这个，好辛酸哦~文献里都不写细节，让人走好多弯路，希望我的经验在你那也适用~ |
6楼2014-04-26 21:38:47
煜，莫烦恼
木虫 (著名写手)
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3楼2013-10-14 14:37:26
7楼2014-04-26 21:40:11
user59888
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【答案】应助回帖
感谢参与，应助指数 +1
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http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=5080927&fpage=1 我不是很懂，但是里面很多人都做过，应该懂，建议联系他们，耐心请教 |
2楼2013-10-14 11:24:29
祸不单行1246
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4楼2013-10-14 15:34:17
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8楼2015-09-25 14:44:47
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测定总巯基含量时，15 mg蛋白样品溶解于5 mL含8 M 尿素的Tris-Gly 缓冲液（0.086 M Tris, 0.09 M Gly 和 0.04 M EDTA, pH 8.0）。测定自由巯基含量时，15 mg样品溶解于5 mL不含尿素的上述Tris-Gly 缓冲液中，而后加入50 μL Ellman 试剂 （DTNB, 即5,5-二硫基双2-硝基苯甲酸溶于Tris-Gly 缓冲液，4 mg/mL），在25℃条件下保温反应60 min, 离心（5000 g, 15 min），上清液在412 nm 处测定吸光值，以含Ellman 试剂的Tris-Gly 缓冲液为空白对照。 巯基含量的计算公式如下： SH (μmol/g) = 73.53×A ×D/C 式中：A —除去试剂空白后样品的吸光度值 D—稀释倍数 C—样品浓度（mg/mL） 问题1：上述公式中稀释倍数D是怎么算的（具体的式子），如果完全按照上述方法是不是就是1？ 问题2：我测的物质为毛发固体样品，二硫键含量在350μmol/g附近，此种测试方法是否具有可行性 谢谢了  |
9楼2015-09-25 20:42:47
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测定总巯基含量时，15 mg蛋白样品溶解于5 mL含8 M 尿素的Tris-Gly 缓冲液（0.086 M Tris, 0.09 M Gly 和 0.04 M EDTA, pH 8.0）。测定自由巯基含量时，15 mg样品溶解于5 mL不含尿素的上述Tris-Gly 缓冲液中，而后加入50 μL Ellman 试剂 （DTNB, 即5,5-二硫基双2-硝基苯甲酸溶于Tris-Gly 缓冲液，4 mg/mL），在25℃条件下保温反应60 min, 离心（5000 g, 15 min），上清液在412 nm 处测定吸光值，以含Ellman 试剂的Tris-Gly 缓冲液为空白对照。 巯基含量的计算公式如下： SH (μmol/g) = 73.53×A ×D/C 式中：A —除去试剂空白后样品的吸光度值 D—稀释倍数 C—样品浓度（mg/mL） 问题1：上述公式中稀释倍数D是怎么算的（具体的式子），如果完全按照上述方法是不是就是1？ 问题2：我测的物质为毛发固体样品，二硫键含量在350μmol/g附近，此种测试方法是否具有可行性 |
10楼2015-09-25 20:43:08
