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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 专业学科区 » 食品 » 其他 » 求教关于DTNB！！！
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偶像的黄昏yy

铜虫 (小有名气)

[求助] 求教关于DTNB！！！ 已有3人参与

测二硫键时，DTNB难溶于水，加热后依然难溶，请问有哪位高手做过这个实验，帮忙教一下
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耶和华是我的牧者，我必不至于缺乏
1楼 2013-10-14 11:16:44
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

钢琴兔

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

我也要做二硫键和巯基的测定，今天第一次配DTNB，是用ph8 的tris-甘氨酸直接稀释定容的，发现DTNB有少量不溶，请教了下侧过巯基的同学，他们说是把缓冲液的各种所需试剂和DTNB一起溶解溶解到离定容还剩一点体积的时候，再调节ph至8,再转移到容量瓶定容。  然后我就做了个试验，把DTNB溶于少量ph8上述缓冲液，发现pH 下降的蛮厉害的，所以我猜是因为这个原因，我用ph8的tris-甘氨酸缓冲液配dtnb才没完全溶解。
最后，我用适量ph8的tris-甘氨酸缓冲液悬浮DTNB，再用氢氧化钠调节pH至8，最后用ph8的tris-甘氨酸缓冲液定容。
第一次配这个，好辛酸哦~文献里都不写细节，让人走好多弯路，希望我的经验在你那也适用~
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6楼2014-04-26 21:38:47
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煜，莫烦恼

木虫 (著名写手)

虫蛹

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
DTNB 应该用tris-gly缓冲液配置，一般为4mg/ml . 多看点文献呗~
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努力努力，奋斗奋斗！
3楼2013-10-14 14:37:26
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钢琴兔

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

我用的tris-glycine 缓冲液是0.086M TRIS 0.09M glycine， 4mM EDTA, 用盐酸调到pH8
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7楼2014-04-26 21:40:11
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普通回帖

user59888

金虫 (文坛精英)

宫创始人 ------小妮

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=5080927&fpage=1
我不是很懂，但是里面很多人都做过，应该懂，建议联系他们，耐心请教
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此人已死，没烧纸的半夜出来喝酒
2楼2013-10-14 11:24:29
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祸不单行1246

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我也测过，容缓冲溶液的，2楼说的对
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哥吸烟、是因为它伤肺，不伤心
4楼2013-10-14 15:34:17
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hbtmsw

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

4mg/mlDTNB用0.5mg/mlEDTA配很好溶，EDTA溶液用100mMPH8.0磷酸氢二钠配制。
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5楼2014-04-18 20:46:11
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jike4321

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 钢琴兔 at 2014-04-26 21:40:11
我用的tris-glycine 缓冲液是0.086M TRIS 0.09M glycine， 4mM EDTA, 用盐酸调到pH8

请问这样子的DTNB该如何保存？
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8楼2015-09-25 14:44:47
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1012203014

金虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 祸不单行1246 at 2013-10-14 15:34:17
我也测过，容缓冲溶液的，2楼说的对

测定总巯基含量时，15 mg蛋白样品溶解于5 mL含8 M 尿素的Tris-Gly 缓冲液（0.086 M Tris, 0.09 M Gly 和 0.04 M EDTA, pH 8.0）。测定自由巯基含量时，15 mg样品溶解于5 mL不含尿素的上述Tris-Gly 缓冲液中，而后加入50 μL Ellman 试剂 （DTNB, 即5,5-二硫基双2-硝基苯甲酸溶于Tris-Gly 缓冲液，4 mg/mL），在25℃条件下保温反应60 min, 离心（5000 g, 15 min），上清液在412 nm 处测定吸光值，以含Ellman 试剂的Tris-Gly 缓冲液为空白对照。
巯基含量的计算公式如下：
SH (μmol/g) = 73.53×A ×D/C
式中：A —除去试剂空白后样品的吸光度值
D—稀释倍数
C—样品浓度（mg/mL）
问题1：上述公式中稀释倍数D是怎么算的（具体的式子），如果完全按照上述方法是不是就是1？
问题2：我测的物质为毛发固体样品，二硫键含量在350μmol/g附近，此种测试方法是否具有可行性
谢谢了
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奋斗！永不止步！
9楼2015-09-25 20:42:47
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1012203014

金虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by hbtmsw at 2014-04-18 20:46:11
4mg/mlDTNB用0.5mg/mlEDTA配很好溶，EDTA溶液用100mMPH8.0磷酸氢二钠配制。

测定总巯基含量时，15 mg蛋白样品溶解于5 mL含8 M 尿素的Tris-Gly 缓冲液（0.086 M Tris, 0.09 M Gly 和 0.04 M EDTA, pH 8.0）。测定自由巯基含量时，15 mg样品溶解于5 mL不含尿素的上述Tris-Gly 缓冲液中，而后加入50 μL Ellman 试剂 （DTNB, 即5,5-二硫基双2-硝基苯甲酸溶于Tris-Gly 缓冲液，4 mg/mL），在25℃条件下保温反应60 min, 离心（5000 g, 15 min），上清液在412 nm 处测定吸光值，以含Ellman 试剂的Tris-Gly 缓冲液为空白对照。
巯基含量的计算公式如下：
SH (μmol/g) = 73.53×A ×D/C
式中：A —除去试剂空白后样品的吸光度值
D—稀释倍数
C—样品浓度（mg/mL）
问题1：上述公式中稀释倍数D是怎么算的（具体的式子），如果完全按照上述方法是不是就是1？
问题2：我测的物质为毛发固体样品，二硫键含量在350μmol/g附近，此种测试方法是否具有可行性
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奋斗！永不止步！
10楼2015-09-25 20:43:08
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