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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 材料区 » 生物材料 » 综合其他 » 【求助】胶体金标记DNA的问题
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qqzhang12

银虫 (小有名气)

[交流] 【求助】胶体金标记DNA的问题 已有4人参与

请教各位，我想用巯基化的DNA标记胶体金，为什么总是连接不上呢？一加入NaCl，胶体金就开始聚集，请问有谁知道是为什么吗？谢谢了！
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1楼 2010-01-12 15:54:29
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qingbo62

木虫 (正式写手)
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yusen_1982(金币+1,VIP+0):欢迎常来生物材料版！ 1-15 15:21
没人回答这个问题……
我也没做过这个方向，蛮讨论一下。
1、你怎么知道DNA没有标记上去？之前，DNA的巯基是不是已经发生交联？有没有定过SH的量？
2、加入NaCl的目的是什么？在哪一步加入？金表面是什么配体？NaCl要梯度加入。

[ Last edited by qingbo62 on 2010-1-13 at 17:52 ]
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2楼2010-01-13 10:41:51
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qqzhang12

银虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by qingbo62 at 2010-1-13 10:41:
没人回答这个问题……
我也没做过这个方向，蛮讨论一下。
1、你怎么知道DNA没有标记上去？之前，DNA的巯基是不是已经发生交联？有没有定过SH的量？
2、加入NaCl的目的是什么？在哪一步加入？金表面是什么配体？ ...

是因为在加入NaCL 进行陈化的时候发现胶体金变色了，也就说明它聚集了，如果DNA 已经接上去的话是不会发生这种情况的。DNA的巯基之前没有计算过，多少会发生交联，但是不会全部都交联。纳米金表面是柠檬酸根离子
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3楼2010-01-15 11:20:44
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qingbo62

木虫 (正式写手)
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薰衣草儿(金币+2,VIP+0):偶觉得，可能pH和离子浓度影响比较大，还有一个就是杂质问题~谢谢专家的回答~ 1-15 20:55
一、确认你合成的金纳米颗粒的质量（保证用干净的瓶子等等，正确的表征），不过这步出问题的可能性比较低；

二、确认DNA的浓度（UV光谱，确度DNA的质量是否合格，谁提供的，是否可靠）和巯基浓度（DTNB确定）。如果不确定SH浓度，就用TCEP进行预处理1h再反应。如果还不行，把TCEP的浓度提高，再除去TCEP。
这步非常关键，我觉得你可能是这步出的问题。

三、最好反应在玻璃瓶中进行，对玻璃瓶进行NaOH预处理。

四、DNA是否存在碱基对之间的作用从而导致颗粒的团聚？相关于一个linker了。排除以上因素再验证这一条。

还补充一个就是NaCl浓度，要从低浓度开始加，如0.1M或0.05M。

[ Last edited by qingbo62 on 2010-1-15 at 15:28 ]
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4楼2010-01-15 15:25:49
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qqzhang12

银虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by qingbo62 at 2010-1-15 15:25:
一、确认你合成的金纳米颗粒的质量（保证用干净的瓶子等等，正确的表征），不过这步出问题的可能性比较低；

二、确认DNA的浓度（UV光谱，确度DNA的质量是否合格，谁提供的，是否可靠）和巯基浓度（DTNB确定）。 ...

你好，谢谢你的建议，我的DNA是上海生工的，我是逐步稀释的所以没有用紫外来确定浓度，下一步会做下紫外的检测，对于先用TCEP预处理的文献，我也有看，我想请教一下怎么除去多余的TCEP呢 我看了用DTT预处理的还用到了column 5，因为我没有做过这类的处理，而且我们实验室的条件比较简陋，很多东西都没有，所以我想请教下。现在我正在做的是参照的是mikin的 JACS,1998,120,1959-1964 这篇文章。还有我用的玻璃瓶都已经硅烷化过了。
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5楼2010-01-16 15:14:59
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XJP1007

木虫 (正式写手)
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，我也在做这方面，遇到了相同问题，希望各位大侠给予帮助啊！！我邮箱是：xuejianpeng@yahoo.cn。
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6楼2010-01-16 16:55:57
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ywliustc

金虫 (小有名气)
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yusen_1982(金币+1,VIP+0):欢迎讨论！！ 1-17 17:09
Nacl可能是因为中和了部分电性导致聚集的，需要控制一个最佳的浓度
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7楼2010-01-17 11:31:58
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zhangzhaowu728

金虫 (小有名气)
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yusen_1982(金币+1,VIP+0):欢迎讨论！！ 1-17 17:09
纳米金表面要进行磷酸盐修饰啊，以增强纳米金的稳定性。
详细的制备过程你看一下这个方法，这里面写的还是比较详细的。另外多看看Mirkin的文章也不错的。
http://www.namipan.com/d/Prepara ... a98ffef0fe1c1230200
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8楼2010-01-17 15:53:57
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qingbo62

木虫 (正式写手)
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薰衣草儿(金币+2,VIP+0):欢迎讨论~ 1-18 11:22
我觉得这个实验你最大的可能失败原因应该还是来自DNA。
先用DTNB对SH进行定量。
再用TCEP处理，过量一两倍就可以，不用除去。如果要过量10倍，要用柱子或超滤除去。
不要用DTT，因为DTT本身有SH。
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9楼2010-01-18 09:07:28
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乖乖宝贝

金虫 (小有名气)
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小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
我也是刚刚接触这方面的知识，看了大家的讨论，真的觉得受益很多。谢谢咯
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尽自己最大的努力，优秀毕业！
10楼2010-02-09 21:56:25
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