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汕头大学海洋科学接受调剂
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qqzhang12

银虫 (小有名气)

[交流] 【求助】胶体金标记DNA的问题 已有4人参与

请教各位,我想用巯基化的DNA标记胶体金,为什么总是连接不上呢?一加入NaCl,胶体金就开始聚集,请问有谁知道是为什么吗?谢谢了!
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qingbo62

木虫 (正式写手)

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薰衣草儿(金币+2,VIP+0):欢迎讨论~ 1-18 11:22
我觉得这个实验你最大的可能失败原因应该还是来自DNA。
先用DTNB对SH进行定量。
再用TCEP处理,过量一两倍就可以,不用除去。如果要过量10倍,要用柱子或超滤除去。
不要用DTT,因为DTT本身有SH。
9楼2010-01-18 09:07:28
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qingbo62

木虫 (正式写手)

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yusen_1982(金币+1,VIP+0):欢迎常来生物材料版! 1-15 15:21
没人回答这个问题……
我也没做过这个方向,蛮讨论一下。
1、你怎么知道DNA没有标记上去?之前,DNA的巯基是不是已经发生交联?有没有定过SH的量?
2、加入NaCl的目的是什么?在哪一步加入?金表面是什么配体?NaCl要梯度加入。

[ Last edited by qingbo62 on 2010-1-13 at 17:52 ]
2楼2010-01-13 10:41:51
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qqzhang12

银虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by qingbo62 at 2010-1-13 10:41:
没人回答这个问题……
我也没做过这个方向,蛮讨论一下。
1、你怎么知道DNA没有标记上去?之前,DNA的巯基是不是已经发生交联?有没有定过SH的量?
2、加入NaCl的目的是什么?在哪一步加入?金表面是什么配体? ...

是因为在加入NaCL 进行陈化的时候发现胶体金变色了,也就说明它聚集了,如果DNA 已经接上去的话是不会发生这种情况的。DNA的巯基之前没有计算过,多少会发生交联,但是不会全部都交联。纳米金表面是柠檬酸根离子
新手上路,请多多关照
3楼2010-01-15 11:20:44
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qingbo62

木虫 (正式写手)

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薰衣草儿(金币+2,VIP+0):偶觉得,可能pH和离子浓度影响比较大,还有一个就是杂质问题~谢谢专家的回答~ 1-15 20:55
一、确认你合成的金纳米颗粒的质量(保证用干净的瓶子等等,正确的表征),不过这步出问题的可能性比较低;

二、确认DNA的浓度(UV光谱,确度DNA的质量是否合格,谁提供的,是否可靠)和巯基浓度(DTNB确定)。如果不确定SH浓度,就用TCEP进行预处理1h再反应。如果还不行,把TCEP的浓度提高,再除去TCEP。
这步非常关键,我觉得你可能是这步出的问题。

三、最好反应在玻璃瓶中进行,对玻璃瓶进行NaOH预处理。

四、DNA是否存在碱基对之间的作用从而导致颗粒的团聚?相关于一个linker了。排除以上因素再验证这一条。

还补充一个就是NaCl浓度,要从低浓度开始加,如0.1M或0.05M。

[ Last edited by qingbo62 on 2010-1-15 at 15:28 ]
4楼2010-01-15 15:25:49
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