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ssyyll1019铜虫 (小有名气)
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【请教】纳米金 DNA修饰 已有8人参与
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大家好，在做DNA 修饰纳米金颗粒的过程中碰到一些问题，再次想请教写各位前辈们。 1.dna与纳米金连接时 需要一定量的TCEP作为巯基得的还原剂，不少文章都注明了TCEP 不能过量很多，请问TCEP过量对dna 的连接会有怎样的影响？ 2.对于粒径14nm的胶体金颗粒，连接DNA前后 可以通过什么方法可以叫直观的验证DNA确实连接上了？ 谢谢各位！ |
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| 电化学 | 实验体系一 | 金、磁珠与抗体的结合 |
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xiaoming8831
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ssyyll1019(金币+1):谢谢参与
ssyyll1019(金币+2):谢谢！ 2010-11-18 13:51:58
ssyyll1019(金币+1):谢谢参与
ssyyll1019(金币+2):谢谢！ 2010-11-18 13:51:58
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第一个问题：TCEP是一种巯基还原剂，就是说能够避免两条DNA之间的巯基形成二巯基，从而不能与金表明发生Au-S反应，但是加多了的话，又会使Au-S键发生还原，从而使已经标记上去的DNA被还原下来。 第二个问题：想知道金颗粒是否连接上DNA相当简单，你按照实验步骤做，如果到最后一步离心用带100毫摩尔盐的缓冲液重悬，你的金颗粒还是红色的，没有发生聚集就表明连接上去了，因为在盐老化的过程中，如果你的金颗粒没有标记上DNA的不会稳定的，就会聚集了。 |
6楼2010-11-17 18:43:38
25楼2018-05-25 14:33:10
erru521
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labladycheng
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ssyyll1019(金币+1):谢谢参与
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1.不知TCEP还原剂的还原能力足够还原Au-S键吗？如果不够强，再过量也不会把Au-S键还原的。另，TCEP是磷酸三氯乙酯，酸性试剂，不知过量的TCEP是否会破坏DNA中的碱性嘌呤杂环。 2.参考一篇纳米金和晶状体蛋白作用的文献吧："Anti-glycation activity of gold nanoparticles", Nanomedicine:Nanotechnology, Biology, and Medicine, 2009, 5, 21-29. 文章中通过做光密度实验，检测蛋白的聚集程度。然后通过动态光散射测聚集体的直径。如果纳米金表面连上DNA链，那应该会产生一定的聚集，同时聚集程度的轻重可以通过测粒径来分析。另外，紫外可见吸收谱也有区别，因为如果有纳米金与DNA相连，分子中的芳香环的紫外吸收会产生变化的。但，我认为只做UV测试不能100%表明纳米金连上DNA了。UV的变化可能是因为Au-S键的形成，也可能是DNA与纳米金只是螯合而已，即并未形成化学键，只是电子间的相互吸引。 不好意思，对于生物我不太懂，只是从纯化学角度看这个问题。很想互相学习，因为我现在做蛋白的纳米修饰。  |
14楼2010-12-01 11:35:31
2楼2010-11-15 10:05:30
3楼2010-11-15 20:08:22
alxz
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