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ssyyll1019

铜虫 (小有名气)

[交流] 【请教】纳米金 DNA修饰 已有8人参与

大家好,在做DNA 修饰纳米金颗粒的过程中碰到一些问题,再次想请教写各位前辈们。
1.dna与纳米金连接时 需要一定量的TCEP作为巯基得的还原剂,不少文章都注明了TCEP 不能过量很多,请问TCEP过量对dna 的连接会有怎样的影响?
2.对于粒径14nm的胶体金颗粒,连接DNA前后 可以通过什么方法可以叫直观的验证DNA确实连接上了?

谢谢各位!
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labladycheng

铁虫 (小有名气)

★
ssyyll1019(金币+1):谢谢参与
引用回帖:
Originally posted by xiaoming8831 at 2010-11-17 18:43:38:
第一个问题:TCEP是一种巯基还原剂,就是说能够避免两条DNA之间的巯基形成二巯基,从而不能与金表明发生Au-S反应,但是加多了的话,又会使Au-S键发生还原,从而使已经标记上去的DNA被还原下来。

第二个问题:想 ...

1.不知TCEP还原剂的还原能力足够还原Au-S键吗?如果不够强,再过量也不会把Au-S键还原的。另,TCEP是磷酸三氯乙酯,酸性试剂,不知过量的TCEP是否会破坏DNA中的碱性嘌呤杂环。

2.参考一篇纳米金和晶状体蛋白作用的文献吧:"Anti-glycation activity of gold nanoparticles", Nanomedicine:Nanotechnology, Biology, and Medicine, 2009, 5, 21-29.
文章中通过做光密度实验,检测蛋白的聚集程度。然后通过动态光散射测聚集体的直径。如果纳米金表面连上DNA链,那应该会产生一定的聚集,同时聚集程度的轻重可以通过测粒径来分析。另外,紫外可见吸收谱也有区别,因为如果有纳米金与DNA相连,分子中的芳香环的紫外吸收会产生变化的。但,我认为只做UV测试不能100%表明纳米金连上DNA了。UV的变化可能是因为Au-S键的形成,也可能是DNA与纳米金只是螯合而已,即并未形成化学键,只是电子间的相互吸引。

不好意思,对于生物我不太懂,只是从纯化学角度看这个问题。很想互相学习,因为我现在做蛋白的纳米修饰。
每天进步一点点
14楼2010-12-01 11:35:31
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liutaoliu

金虫 (正式写手)

★
ssyyll1019(金币+1):谢谢参与
我常识回答第二个问题,能不能通过紫外,看连接DNA前后的吸收峰变化?
开心就笑,不开心就等会儿再笑
2楼2010-11-15 10:05:30
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mophous

金虫 (小有名气)

★
ssyyll1019(金币+1):谢谢参与
颜色变化可以表明DNA和Au NPs连到一起,1996年的Science上有篇文章讲过这个!
3楼2010-11-15 20:08:22
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alxz

铁杆木虫 (职业作家)

其实我是一只大老鼠

★
ssyyll1019(金币+1):谢谢参与
引用回帖:
Originally posted by ssyyll1019 at 2010-10-17 18:36:41:
大家好,在做DNA 修饰纳米金颗粒的过程中碰到一些问题,再次想请教写各位前辈们。
1.dna与纳米金连接时 需要一定量的TCEP作为巯基得的还原剂,不少文章都注明了TCEP 不能过量很多,请问TCEP过量对dna 的连接会有 ...

第一个不清楚
第二个应该DLS能看得出来,接上DNA的金颗粒水力学尺寸应该会变很大。
风起,夜未央~流年,乱浮生
4楼2010-11-15 20:15:21
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