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小凡你行的金虫 (正式写手)
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[求助]
纳米金与巯基DNA的修饰相关问题
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由于小生刚刚接手这个课题，心中顿感茫然。看过一些帖子和文献，却思维尤觉混乱。在此希望哪位帅哥大侠帮我解开困惑，给予详谈，拨开实验失败之阴霾，重见精准数据之美好。小生必定感激不尽。 该好好说话了~  问题一：关于整个流程应该怎样的一个步骤和流程。之前的帖子我也看了一些，总是觉得凌乱，东一句，西一句的。而且方法不一。我想知道，巯基的DNA是否应在与纳米金结合之前先进行活化，那么活化步骤是什么，用什么试剂以及，摩尔比。还有记下来是不是就可以直接与纳米金放在一起里用摇床培育16个小时呢？再接下来是不是还要用NaCl的老化，我又不清楚了。老化是怎么回事，他的浓度时多少。 问题二：最简单表征DNA与纳米金是否接上手段是什么呢？ 问题三：只是知道Mirkin的很多文章关于这个试验很是权威，但是我只是知道他的名字，文章刚才看了下，比较多。能不能推荐几篇给我，直接一针见血的文献。直接发文章标题或者链接就可以，我自己下载就O了。 问题虽然较多，但是希望各位大牛理解我此时举目无门的心境。先谢谢大家~ |
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【答案】应助回帖
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小凡你行的: 金币+30, 博学EPI+1, ★★★很有帮助 2013-04-04 23:33:27
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For the preparation of DNA-Au NPs, the terminal disulfide groups of the DNA strands were reduced by soaking the strands in a 0.1 M dithiothreitol phosphate buffer solution (0.17 M phosphate, pH 8.0) for 30 min. The cleaved DNA strands were purified on a NAP-5 column (GE Healthcare) and added to the gold colloid (the final oligonucleotide concentration is ~ 3 μM). The solution was buffered to 0.15 M NaCl, 10 mM phosphate, and 0.01 % SDS by simultaneously adding appropriate amount of 1 % SDS solution, 2 M NaCl solution and 0.1 M phosphate buffer solution (pH 7.4). After incubation overnight at room temperature with gentle shaking, the Au NP solution was centrifuged and redispersed in 0.1 M NaNO3, 0.005 % Tween 20, 10 mM MOPS buffer (detection buffer, pH 7.5) after the supernatant was removed. 以上是我找到的mirkin 实验组 做DNA与纳米金颗粒连接的literature procedure。希望对你有帮助 |
3楼2013-04-01 10:34:26
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