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新虫 (初入文坛)

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[交流] 【交流】SUMO 融合蛋白切标签踩坑？聊聊 SUMO 蛋白酶实操体会已有1人参与

做蛋白表达纯化，遇到难溶蛋白、抗菌肽、细胞因子这类样品时，SUMO标签几乎是很多人的首选。

它强大的促溶能力，能把很多极易形成包涵体的目标蛋白“救出来”，大幅提升蛋白可溶性，让原本完全不表达、全部沉淀的蛋白顺利得到可溶性上清。不少课题组靠SUMO标签拿到了梦寐以求的可溶性蛋白，本以为实验即将步入收尾，结果大量人力物力全部卡在最后一步——标签酶切。

相信不少同行都踩过这些非常现实的坑：
👉明明蛋白可溶性很好，但是酶切始终不完全，电泳条带上一大截融合蛋白残留；反复补加蛋白酶、成倍延长孵育时间，依旧看不到明显改善，珍贵样本白白消耗；
👉很多目的蛋白本身热稳定性极差，只能4℃低温条件下反应。可市面上部分SUMO蛋白酶低温活性大打折扣，想要切充分就要投入大量酶，试剂成本直线上升；
👉酶切后蛋白N端多出多余氨基酸残基，后续做晶体筛选、蛋白互作、活性功能检测直接受干扰，实验数据不稳定，前期表达纯化的努力大打折扣；
👉SUMO蛋白酶单价普遍偏高，小试就要多次做条件梯度摸索，几次预实验下来试剂消耗大，对经费有限的课题组很不友好；
👉部分产品不配套反应缓冲液，需要自己调试盐离子、还原剂、去污剂配比，反复摸体系，额外增加大量实验工作量。

千辛万苦诱导表达、过柱纯化拿到可溶性蛋白，最后却栽在标签切除这一步，既浪费样本，又耽误课题进度。

今天跟大家分享自研SUMO蛋白酶，专门针对SUMO融合标签切割，针对性解决上面这些高频实验痛点。

关于这款 SUMO 蛋白酶
SUMO蛋白酶识别SUMO标签完整的空间构象实现无痕切割，并非简单识别线性氨基酸序列，切除SUMO促溶标签后，得到N端无多余残基的天然目的蛋白。非常适合难溶蛋白、多肽、抗菌肽、细胞因子制备以及结构生物学相关研究。

实际使用中很实用的产品特点
🔹酶切效率稳定，配套专用10×反应缓冲液**
产品直接配套提供10X SUMO Protease Buffer，拿来即可配制反应体系，省去自行摸索缓冲液组分的大量时间。标准条件30℃孵育条件下切割效率优秀；
活性定义：30℃条件下，1 U酶1 h可以酶切5 μg SUMO融合蛋白，酶切效率可达85%以上。

🔹支持4℃低温酶切，适配热敏感脆弱蛋白**
针对热不稳定、极易降解的目的蛋白，可以直接在4℃环境开展酶切；只需适当延长孵育时间，适度增加酶用量就能够实现有效切割，不必为追求酶切效率被迫升高温度，最大程度保护目标蛋白构象与活性。

🔹高浓度酶液，节省试剂使用成本**
酶浓度高达10 Units/μL，纯度≥90%，分子量26 kDa。高浓缩剂型，单次反应只需要加入很少量酶，不管是多组条件梯度摸索，还是小规模样品制备，都可以有效降低试剂消耗，减轻经费压力。

💡实操小提示
▪标准50 μL参考反应体系：SUMO融合蛋白5 μg + 10×缓冲液5 μL + SUMO蛋白酶0.1 μL，补水定容；30℃孵育，建议在1‑6 h分别取样，SDS‑PAGE检测，确定样本的最优孵育时间。
▪4℃酶切方案：低温下酶反应速率下降，需要延长孵育时间，同时适度提高酶用量，以此保障切割效果。
▪保存条件‑20℃，有效期1 年；包装规格：1000 Units。
▪贮存缓冲液组分：25 mM Tris‑HCl、250 mM NaCl、0.5 mM DTT、0.1% Igepal、50% 甘油。
▪⚠本产品仅限科研使用。

不管是难溶蛋白、多肽的小试条件摸索，还是小规模样品制备，这款SUMO蛋白酶都可以适配。如果你日常经常做SUMO融合蛋白纯化，可以拿来试一试。

正在使用SUMO标签的同行欢迎一起交流讨论，聊聊你遇到过哪些酶切难题。需要小样评估的虫友，可以评论或者站内私信我，祝大家蛋白纯化少踩坑，实验一路顺利！

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