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[交流]
【交流】蛋白标签切除踩坑不断？聊聊 TEV 蛋白酶实操体会
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各位虫友，做重组蛋白纯化、结构生物学的小伙伴，想必都遇到过这些头疼的实验困境： 用传统蛋白酶切标签，容易出现非特异性切割，目标蛋白被切碎；镍柱洗脱后高咪唑环境直接让酶失活，必须额外透析换缓冲液，珍贵蛋白样本反复处理造成大量损失；部分蛋白本身构象脆弱，高温酶切就容易降解变性。选不对蛋白酶，会白白耗费大量样本与时间。 结合自己的实验踩坑经历，跟大家分享一款自研TEV 蛋白酶，专门用于融合蛋白标签切除，针对性解决上面这些痛点。 关于这款 TEV 蛋白酶 TEV 蛋白酶专一识别ENLYFQG酶切位点，精准切割融合蛋白的 His、GST 等亲和标签，获取不带多余氨基酸的天然目的蛋白，广泛用于重组蛋白纯化、结构生物学及各类蛋白功能研究。 实际使用中感受比较突出的几个特点 1.缓冲体系耐受强，不怕咪唑与高盐 可以耐受镍柱洗脱条件下的高浓度咪唑，同时兼容 NaCl、KCl 等多种盐离子体系。部分样品镍柱洗脱后无需复杂换液透析，直接加酶即可开展酶切，减少多步操作带来的蛋白损耗，对低表达、难获得的珍贵样本十分友好。 2.宽温度区间都有活性，兼顾快速反应与蛋白保护 4‑37℃均可保持高效酶切活性，最适反应温度 30℃。稳定性灵活可调，想要快速处理样品可以 30℃孵育；遇到构象敏感、易降解的蛋白，直接 4℃低温完成酶切，不用为追求切割效率牺牲目的蛋白完整性。 3.位点识别专一，切割干净无杂带 特异性识别 ENLYFQG 序列，很少发生非特异性副切割，最大程度保留目标蛋白完整，酶切后 SDS‑PAGE 条带干净，减少后续纯化的压力。 实操小提示 ▪活性定义：pH8.0、30℃条件下，1 U 可在 1 小时内裂解 85% 以上 3 μg 对照底物； ▪推荐稀释缓冲液：50 mM Tris‑HCl (pH8.0)，150 mM NaCl，可按需对酶进行稀释使用； ▪储存条件‑20℃，有效期 1 年；纯度≥90%，分子量 28.3 kDa；包装规格 1000 Units、5000 Units。 不管是课题组基础科研做蛋白功能解析，还是样品放大制备，这款 TEV 蛋白酶都可以适配。如果你也经常被标签切除环节卡住，可以拿来试一试。 正在做融合蛋白酶切的同行欢迎一起交流讨论，有需要小样评估的虫友，可以评论或者站内私信我，祝大家蛋白纯化一次成功！ |
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2026-08-19 11:01:27, 84.32 K
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