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偶像的黄昏yy

铜虫 (小有名气)

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专业: 食品科学基础

[求助] 求教关于DTNB！！！已有3人参与

测二硫键时，DTNB难溶于水，加热后依然难溶，请问有哪位高手做过这个实验，帮忙教一下

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耶和华是我的牧者，我必不至于缺乏

1楼 2013-10-14 11:16:44

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

1012203014

金虫 (正式写手)

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专业: 化学反应工程

引用回帖:

4楼: Originally posted by 祸不单行1246 at 2013-10-14 15:34:17
我也测过，容缓冲溶液的，2楼说的对

测定总巯基含量时，15 mg蛋白样品溶解于5 mL含8 M 尿素的Tris-Gly 缓冲液（0.086 M Tris, 0.09 M Gly 和 0.04 M EDTA, pH 8.0）。测定自由巯基含量时，15 mg样品溶解于5 mL不含尿素的上述Tris-Gly 缓冲液中，而后加入50 μL Ellman 试剂（DTNB, 即5,5-二硫基双2-硝基苯甲酸溶于Tris-Gly 缓冲液，4 mg/mL），在25℃条件下保温反应60 min, 离心（5000 g, 15 min），上清液在412 nm 处测定吸光值，以含Ellman 试剂的Tris-Gly 缓冲液为空白对照。
巯基含量的计算公式如下：
SH (μmol/g) = 73.53×A ×D/C
式中：A —除去试剂空白后样品的吸光度值
D—稀释倍数
C—样品浓度（mg/mL）
问题1：上述公式中稀释倍数D是怎么算的（具体的式子），如果完全按照上述方法是不是就是1？
问题2：我测的物质为毛发固体样品，二硫键含量在350μmol/g附近，此种测试方法是否具有可行性
谢谢了