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能否用降落PCR来进行半定量实验
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我是新手，最近在做半定量PCR 如图，三个基因的退火温度都是用梯度PCR选出来的退火温度，温度确定的条件是目的产物扩增效率最高，相对引物二聚体来说较亮。 10-11是11号做出来的图片，从上到下分别对应G,P,C三个基因。从左到右每一个孔依次增加两个循环。循环数为17,19,21,23,25,27,29,31,33,35,37,39,41,43,45 10-12是今天做出来的图，这张图下边倒数第二带亮亮的，这是加样孔（不知为何加样孔如此亮）。从上到下依旧是G,P,C三个基因。同11号相比，所加入的模板浓度和体积都没有变化，引物浓度降为11号引物浓度的一半。1,2孔为一个循环数，3,4孔为一个循环数，依次类推，共6个循环数。从左到右，依次增加三个循环。循环数为29,32,35,38,41,44 所得的结果都不好。我是不是该换引物了。引物直接从外文文献里找，或者我能否用降落PCR来进行半定量PCR实验。求高手指导。  10-11.JPG  10-12.JPG [ Last edited by 月亮先生 on 2013-10-12 at 22:49 ] |
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