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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 关于同源重组双交换
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free-fish

铜虫 (正式写手)

[求助] 关于同源重组双交换 已有2人参与

目前正在通过同源重组双交换的方法对黄单胞杆菌属的一个细菌的某个基因进行突变，单交换后用目的基因缺失片段上下游两臂的外侧基因扩增的结果很奇怪，既有与野生型一样大的片段，也有刚好与设计缺失后的片段大小一致的片段，我想问问大家，这个是因为那个用于同源重组而转到目的菌的质粒独立存在在目的菌体内了么？但是，质粒不是有不兼容性么，有谁帮忙分析下，不胜感激！
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1楼 2013-10-11 10:34:55
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ccf821020

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by hharl at 2014-05-22 08:49:33
你的情况是， 1st crossover 已经发生了，质粒结合在了chrosome上了， 但是还没有发生2nd crossover。
这也就是为什么PCR检测出了两条带。建议大量筛选。1000colonies 中最少会有发生2nd crossover 的目的mutant。

你好，问题解决了吗？我现在也遇到问题了，我用的是自杀质粒，单交换获得了，但是双交换死活弄不出。传了10代挑了800多株，只有1株是敏感型，经过验证是回复成了野生型的菌株。我还需要大量再筛1000个嘛?
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4楼2017-09-01 09:47:34
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hharl

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

你的情况是， 1st crossover 已经发生了，质粒结合在了chrosome上了， 但是还没有发生2nd crossover。
这也就是为什么PCR检测出了两条带。建议大量筛选。1000colonies 中最少会有发生2nd crossover 的目的mutant。
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2楼2014-05-22 08:49:33
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dayulee

木虫 (正式写手)

愚木虫

【答案】应助回帖

我也有碰到过类似的问题，应该是二轮交换还没有发生，有的菌交换效率有可能会比较低。
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好好学习，天天向上
3楼2014-12-30 23:23:17
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