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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 过镍柱的问题
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coffee159

金虫 (小有名气)

[求助] 过镍柱的问题

包涵体蛋白溶解在溶解液中，镍柱重生以后加入蛋白并收集蛋白滤液以后镍柱本来的蓝色变为了白色。是其中的镍离子消失了吗？溶解液中有1mM的EDTA，请问是这个1mM的EDTA螯合了镍柱中镍离子吗？
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1楼 2013-10-06 21:44:44
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yanfang2012

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
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coffee159: 金币+2, ★有帮助 2013-10-08 18:43:07
你用什么溶液洗脱的蛋白？溶解液里面为什么加EDTA呢？
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believe yourself！
2楼2013-10-07 22:08:45
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fuyuandj86

版主 (著名写手)

己所不欲，勿施于人

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
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kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2013-10-08 08:08:57
coffee159: 金币+2, ★★★很有帮助 2013-10-08 18:45:33
你确定你配的是elution buffer不是regeneration buffer?
一般来说洗脱液就是比较高浓度的咪唑,不加EDTA的
1mM EDTA是在纯化结束后为了重复使用Ni柱,把上面的Ni2+除去然后重新挂镍用的.
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The doer of good becomes good, the doer of evil becomes evil.
3楼2013-10-07 23:03:34
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jineijin1227

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
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coffee159: 金币+2, ★★★很有帮助 2013-10-08 18:46:16
EDTA可以将镍离子和其他成分都洗脱下来，所以它经常是层析柱的最后一步，洗脱后柱会变成无色的
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4楼2013-10-08 08:59:32
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coffee159

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by yanfang2012 at 2013-10-07 22:08:45
你用什么溶液洗脱的蛋白？溶解液里面为什么加EDTA呢？

用的洗脱液是含有10mM的咪唑lysis buffer和含500mM咪唑的elution buffer 的不同比例的混合液。溶解液的配方是从师姐那找的，具体为什么加EDTA我也不太清楚。
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5楼2013-10-08 18:42:57
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coffee159

金虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by fuyuandj86 at 2013-10-07 23:03:34
你确定你配的是elution buffer不是regeneration buffer?
一般来说洗脱液就是比较高浓度的咪唑,不加EDTA的
1mM EDTA是在纯化结束后为了重复使用Ni柱,把上面的Ni2+除去然后重新挂镍用的.

镍柱的重生我们去除镍离子用的是100mM的EDTA.洗脱液中没有加EDTA,只是包涵体溶解液中有1mM的EDTA
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6楼2013-10-08 18:45:28
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coffee159

金虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by jineijin1227 at 2013-10-08 08:59:32
EDTA可以将镍离子和其他成分都洗脱下来，所以它经常是层析柱的最后一步，洗脱后柱会变成无色的

浓度1mM的也能把镍离子洗脱下来吗
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7楼2013-10-08 18:46:10
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yanfang2012

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by coffee159 at 2013-10-08 18:42:57
用的洗脱液是含有10mM的咪唑lysis buffer和含500mM咪唑的elution buffer 的不同比例的混合液。溶解液的配方是从师姐那找的，具体为什么加EDTA我也不太清楚。...

一般只是镍柱重生的时候才加EDTA的，如果是为了溶解包涵体，好像别人都用的尿素
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8楼2013-10-08 21:57:36
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coffee159

金虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by yanfang2012 at 2013-10-08 21:57:36
一般只是镍柱重生的时候才加EDTA的，如果是为了溶解包涵体，好像别人都用的尿素...

恩，好的，我直接用尿素试一下。
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9楼2013-10-09 17:01:49
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