| 查看: 5240 | 回复: 20 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
[求助]
请教140KD蛋白的转膜条件
|
|||
| 请教各位前辈，最近在做 TLR7140kd的蛋白，试过的转膜条件有恒压100v（电流在236ma左右）,转2小时；横流300ma(电压在135v左右)2小时，转完膜后用丽春红染膜，可以看到170kd的蛋白条带，用的是（10-170kd）的Marker，但显影的时候我的目的条带没有出现，用的一抗是CST的推荐浓度1：1000,1:800，均试过，二抗1:5000，1:8000，1:9000,1：10000，140kd的条带始终没有出现，170kd的条带却压出来了，虽然条带很细，而且背景也很深请问各位前辈我的转膜条件有问题吗？还是需要提高一抗浓度？应该如何改进，请各位前辈不吝赐教，谢谢，急急急！ |
回复此楼» 猜你喜欢
售SCI一区文章，我:8 O5 51O 54,科目齐全,可+急
已经有5人回复
-
售SCI一区文章，我:8 O5 51O 54,科目齐全,可+急
已经有6人回复
-
售SCI一区文章，我:8 O5 51O 54,科目齐全,可+急
已经有7人回复
-
售SCI一区文章，我:8 O5 51O 54,科目齐全,可+急
已经有7人回复
-
售SCI一区文章，我:8 O5 51O 54,科目齐全,可+急
已经有9人回复
-
售SCI一区文章，我:8 O5 51O 54,科目齐全,可+急
已经有4人回复
-
售SCI一区文章，我:8 O5 51O 54,科目齐全,可+急
已经有6人回复
-
售SCI一区文章，我:8 O5 51O 54,科目齐全,可+急
已经有5人回复
-
售SCI一区文章，我:8 O5 51O 54,科目齐全,可+急
已经有8人回复
-
售SCI一区文章，我:8 O5 51O 54,科目齐全,可+急
已经有10人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 询问western blot关于Bio-Rad电转仪的使用
已经有6人回复
- 104KD的蛋白，做western blot电泳和转膜时间及膜的选择？
已经有21人回复
- 请问20多kD的蛋白做Western可不可以用湿转？另外需要注意些什么？
已经有20人回复
- 要分离3-500kd的蛋白，选择什么样的方法和仪器比较好？（超滤管/超滤膜？）
已经有4人回复
- 请教高手，要用凝固的猪血做蛋白质电泳，怎么提取蛋白质？
已经有4人回复
- 请教大家，跨膜蛋白的同源建模，遇到了困难
已经有3人回复
- 【求助/交流】请教大分子量蛋白western blot转膜的一些问题
已经有10人回复
- 【求助/交流】请教多个蛋白质序列比对显示保守区域的问题
已经有9人回复
★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励应助！ 2013-10-07 01:30:50
gyesang: 金币+2, 鼓励应助！ 2013-10-07 01:30:50
|
你那170大小的也有可能就是你的目的条带。不知道你用的是什么蛋白MARKER，你可以确定你显出来的条带是170kDa吗？ 如果想增强信号的话。不知道你用的是什么细胞裂解缓冲液，比如说你可以直接用LOADING BUFFER去裂解细胞，这样裂解比较充分。还有THERMO（以前的PIERCE）出一种super ECL的底物，可以增强信号。 不过还是建议你最好能拿到个质粒，这样可以确定那170的是否是你的目的条带。你可以考虑去找已经发表过文章的作者要，一般都会给，或者你去ADDGENE看看。买一个质粒也不贵 祝好运 |
8楼2013-10-06 23:27:13
2楼2013-10-06 00:24:31
ljsh
铁杆木虫 (著名写手)
- 应助: 7 (幼儿园)
- 金币: 9612.1
- 红花: 1
- 帖子: 1836
- 在线: 382小时
- 虫号: 152856
- 注册: 2006-01-02
- 专业: 免疫学研究新技术与新方法
3楼2013-10-06 08:28:25
4楼2013-10-06 22:51:56
