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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 反复冷冻法提取DNA的效果怎么样？
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中原揽辔

铜虫 (初入文坛)

[求助] 反复冷冻法提取DNA的效果怎么样？

对分离的细菌进行PCR鉴定，直接用活菌液进行PCR效果不太好，请问如果反复煮沸冷冻处理细菌后再进行PCR效果怎么样？有做过的吗？我现在因为做实验时间比较紧张，不想随便试了，请这样做过的小伙伴们指点一下，谢谢各位，拜托了
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1楼 2013-09-25 20:18:32
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肥猫p

木虫 (正式写手)
有些菌确实菌落pcr效果不好。但是想弱弱问下，有反复煮沸冷冻的功夫，干嘛不直接提下基因组？
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2楼2013-09-25 23:27:01
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lvshilu

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
煮沸5min，或者冻融5次效果都可以，目的就是破壁嘛，或者干脆冻融3次，煮沸5min，搞定！
另外，要离心洗干净培养基，模板量不能太多，也别太少，目测OD600约0.1吧，呵呵，试一试。
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3楼2013-09-26 18:56:42
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