24小时热门版块排行榜    

查看: 1846  |  回复: 7

feipiaolw

新虫 (初入文坛)

[求助] 300copies/uL浓度的RNA做RT-PCR检测不出来 已有2人参与

从IDT合成的microRNA,纯度应该是有保证的,以10倍稀释,共7个梯度,从300000-3copies/uL,然后反转录,300copies/uL浓度的RNA反转录就没有扩增了,3000copies/uL浓度以上的有扩增,引物和反转录试剂盒都是life公司的,反转录效率应该在90%以上,也比较小心的在干净环境下的DEPC水和除酶的管子,降解也不会很快吧?那究竟是什么原因呢? 多谢指教
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

学术一点,挺好的,要坚持
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

pennchem

专家顾问 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
amisking: 金币+2, 鼓励发帖交流 2013-09-18 22:32:03
不是每个反应都能实现单拷贝扩增的吧,或者目前的反应体系的灵敏度只能大都3000c/ul,优化一下,提高灵敏度就可以用更低的模板做出来。
当然如果RNA降解了,就又另当别论了。
行至水穷处,坐看云起时
2楼2013-09-18 21:11:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

妳口妳口

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
应该先反转录再稀释,浓度太低RNA容易讲解

[ 发自小木虫客户端 ]
3楼2013-09-19 11:42:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

feipiaolw

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 妳口妳口 at 2013-09-19 11:42:00
应该先反转录再稀释,浓度太低RNA容易讲解

试过反转录了再稀释,情况还是一样的,300copies/uL就检测不到了。
学术一点,挺好的,要坚持
4楼2013-09-22 10:12:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

feipiaolw

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by pennchem at 2013-09-18 21:11:27
不是每个反应都能实现单拷贝扩增的吧,或者目前的反应体系的灵敏度只能大都3000c/ul,优化一下,提高灵敏度就可以用更低的模板做出来。
当然如果RNA降解了,就又另当别论了。

反应条件都是ABI公司给出的,应该是优化过的,我自己也不知道该怎么改。
学术一点,挺好的,要坚持
5楼2013-09-22 10:17:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

huayueyang

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

RNA降解,弄外源RNA酶清除剂处理一下,台面,器材,吸头离心管啥的。、
坚持!
6楼2013-09-24 16:20:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

阿思only

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

我想请问反转录的引物是如何得到的?用的什么引物?
7楼2014-08-12 13:28:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

拷贝数的测定不准吧,按理说100个模板完全可以用PCR检测到。
8楼2014-08-12 14:54:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 feipiaolw 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[硕博家园] 售SCI一区文章,我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 0XLacIJUOj8D 2026-08-24 7/350 2026-08-25 03:24 by BZKMTicpDhFj
[考博] 售SCI一区文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 0XLacIJUOj8D 2026-08-24 3/150 2026-08-25 01:47 by BZKMTicpDhFj
[基金申请] 如果此刻你正在为国基感到焦虑,不妨来听听这首《基金之外》 +7 scalable 2026-08-24 7/350 2026-08-24 23:01 by anata1209
[基金申请] 没有任何消息-是不是就凉了 +7 图啦图啦 2026-08-24 8/400 2026-08-24 22:00 by maomao_da
[论文投稿] 售SCI-T0P文章,我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 0XLacIJUOj8D 2026-08-24 3/150 2026-08-24 21:59 by BZKMTicpDhFj
[基金申请] 能否退出参与的面上项目解除限项 +21 koalala 2026-08-24 24/1200 2026-08-24 19:25 by 家与远方
[基金申请] 2026国自然函评费到账 +17 羊腰板 2026-08-21 19/950 2026-08-24 16:52 by iaeyuan
[基金申请] 建议基金发布提前给出明确的时间点 +13 kulium 2026-08-21 16/800 2026-08-24 16:27 by superceng
[基金申请] 今日不放榜?网传国自然预计 8 月 27 日可查结果 +17 医学老男孩 2026-08-20 21/1050 2026-08-24 14:21 by refreshing11
[基金申请] 估计是周四 +4 archvillain 2026-08-18 4/200 2026-08-24 13:53 by zzuzxg
[基金申请] 范进中举一文的中心思想 +6 炎黄贵胄 2026-08-22 7/350 2026-08-24 11:58 by 6543yes
[基金申请] 朋友圈看到的 +7 wangzilk 2026-08-18 9/450 2026-08-24 10:50 by cmrandy
[基金申请] 让我中一个面上吧! +13 大萍1987 2026-08-20 16/800 2026-08-24 10:23 by 太傻了
[基金申请] 放榜前的不淡定 20+4 snowwithsea 2026-08-19 17/850 2026-08-24 10:20 by echo8914667
[基金申请] 什么时候开奖? +10 CrisMessi 2026-08-18 11/550 2026-08-24 06:50 by 开心的小狮子
[基金申请] 2026年的国家社科基金项目通讯评审的新规则与新动向、新挑战 +4 process2012 2026-08-23 5/250 2026-08-23 19:58 by jurkat.1640
[基金申请] 今天放榜吗? +15 布布和一二 2026-08-19 16/800 2026-08-23 09:55 by 张春生
[基金申请] 今天放榜没戏了吧 +9 yuleib84 2026-08-19 11/550 2026-08-21 10:06 by gltch
[基金申请] 基金啊基金 +4 longfie172 2026-08-20 4/200 2026-08-21 08:58 by mark mao
[基金申请] 重要消息,中午系统在维护 +11 yuleib84 2026-08-18 12/600 2026-08-20 11:09 by xskun
信息提示
请填处理意见