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feipiaolw

新虫 (初入文坛)

应助: 2 (幼儿园)
金币: 19.5
帖子: 14
在线: 3.9小时
虫号: 1187452
注册: 2011-01-11
性别: MM
专业: 生物化学

[求助] 300copies/uL浓度的RNA做RT-PCR检测不出来已有2人参与

从IDT合成的microRNA，纯度应该是有保证的，以10倍稀释，共7个梯度，从300000-3copies/uL,然后反转录，300copies/uL浓度的RNA反转录就没有扩增了，3000copies/uL浓度以上的有扩增，引物和反转录试剂盒都是life公司的，反转录效率应该在90%以上，也比较小心的在干净环境下的DEPC水和除酶的管子，降解也不会很快吧？那究竟是什么原因呢？多谢指教

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RNA浓度只有几十ng/ul，不知道可不可以反转录做RT（在线急等）已经有12人回复

学术一点，挺好的，要坚持

1楼 2013-09-18 16:16:17

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

pennchem

专家顾问 (正式写手)

专家经验: +21
MolEPI: 1
应助: 297 (大学生)
金币: 10353.7
散金: 65
红花: 28
帖子: 595
在线: 1097.3小时
虫号: 2139205
注册: 2012-11-21
专业: 生物大分子结构与功能
管辖: 生物科学

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
amisking: 金币+2, 鼓励发帖交流 2013-09-18 22:32:03

不是每个反应都能实现单拷贝扩增的吧，或者目前的反应体系的灵敏度只能大都3000c/ul，优化一下，提高灵敏度就可以用更低的模板做出来。
当然如果RNA降解了，就又另当别论了。

赞一下(1人)

行至水穷处，坐看云起时

2楼2013-09-18 21:11:27

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

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