应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 300copies/uL浓度的RNA做RT-PCR检测不出来
51/1返回列表
查看: 1487  |  回复: 7
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

feipiaolw

新虫 (初入文坛)

[求助] 300copies/uL浓度的RNA做RT-PCR检测不出来 已有2人参与

从IDT合成的microRNA，纯度应该是有保证的，以10倍稀释，共7个梯度，从300000-3copies/uL,然后反转录，300copies/uL浓度的RNA反转录就没有扩增了，3000copies/uL浓度以上的有扩增，引物和反转录试剂盒都是life公司的，反转录效率应该在90%以上，也比较小心的在干净环境下的DEPC水和除酶的管子，降解也不会很快吧？那究竟是什么原因呢？ 多谢指教
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
学术一点，挺好的，要坚持
1楼 2013-09-18 16:16:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

feipiaolw

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 妳口妳口 at 2013-09-19 11:42:00
应该先反转录再稀释，浓度太低RNA容易讲解

试过反转录了再稀释，情况还是一样的，300copies/uL就检测不到了。
赞一下 回复此楼
学术一点，挺好的，要坚持
4楼2013-09-22 10:12:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 8 个回答

pennchem

专家顾问 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
amisking: 金币+2, 鼓励发帖交流 2013-09-18 22:32:03
不是每个反应都能实现单拷贝扩增的吧，或者目前的反应体系的灵敏度只能大都3000c/ul，优化一下，提高灵敏度就可以用更低的模板做出来。
当然如果RNA降解了，就又另当别论了。
赞一下(1人) 回复此楼
行至水穷处，坐看云起时
2楼2013-09-18 21:11:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

妳口妳口

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
应该先反转录再稀释，浓度太低RNA容易讲解

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下(2人) 回复此楼
3楼2013-09-19 11:42:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

feipiaolw

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by pennchem at 2013-09-18 21:11:27
不是每个反应都能实现单拷贝扩增的吧，或者目前的反应体系的灵敏度只能大都3000c/ul，优化一下，提高灵敏度就可以用更低的模板做出来。
当然如果RNA降解了，就又另当别论了。

反应条件都是ABI公司给出的，应该是优化过的，我自己也不知道该怎么改。
赞一下 回复此楼
学术一点，挺好的，要坚持
5楼2013-09-22 10:17:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 8 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭