应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » PCR总是出现上下拖尾，前后都花费快半个月了，求虫友帮忙
101/1返回列表
查看: 2176  |  回复: 9
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

jxmingcyl

铁虫 (初入文坛)

[求助] PCR总是出现上下拖尾，前后都花费快半个月了，求虫友帮忙

这是我扩增后验证结果，目的条带大小是对的，但是出现上下拖尾了，不知道怎么办，我用的是天根的MIX，引物0.5微升的，模板稀释50和100倍结果是一样的
PCR总是出现上下拖尾，前后都花费快半个月了，求虫友帮忙
AOA扩增出现拖尾
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2013-09-16 10:53:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

RUI1990

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你可以做一个纯阴性对照，即不加模板，看看是否还会出现拖尾现象，出现了说明除模板外有试剂污染，影响PCR。
赞一下 回复此楼
做自己
2楼2013-09-16 11:08:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

firewolfbing

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2013-09-16 12:24:25
第一，你的点样量有点大，看mark就知道。
第二，你的特异性还可以，条带还是很单一的。只要做些优化就可以了，不知道你有没有优化了退火温度，如果没有，找下最佳退火应该能解决问题。
第三，天根的mix没用过，不知道Mg加的是多少，你的片段的扩增效率很好，可以适当的降低Mg离子的浓度。
（你的6，7两个条带就很好看啊，很特异，很漂亮。其实你的拖带不明显的，切个胶就能做后续试验了。）
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2013-09-16 11:12:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

phoenix211

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我觉得这样的结果不影响后续回收吧？
楼主为什么纠结这个呢？
赞一下 回复此楼
4楼2013-09-16 14:45:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jxmingcyl

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by phoenix211 at 2013-09-16 14:45:13
我觉得这样的结果不影响后续回收吧？
楼主为什么纠结这个呢？

我不回收直接去做DGGE，所以这种拖尾就很让人头疼了
赞一下 回复此楼
5楼2013-09-16 19:16:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

冰风颤木

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2013-09-17 11:31:36
楼主你好 这个感觉有点特异性扩增了 在PCR的过程中
1、要全部冰浴 可以减少特异性扩增；
2、注意加样顺序
赞一下 回复此楼
船到桥头自然直
6楼2013-09-17 11:14:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tjwade

铁杆木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
这个还好啦 不算怎么拖带 不影响后续DGGE的
赞一下 回复此楼
努力刻苦
7楼2013-09-17 11:44:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

phoenix211

金虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by jxmingcyl at 2013-09-16 19:16:34
我不回收直接去做DGGE，所以这种拖尾就很让人头疼了...

可以是下降低退火温度  也可以试下降低镁离子的浓度  还有就是模板得干净  以前实验里有人做DGGE  模板貌似杂质较多  扩增出来后拖尾比较厉害
赞一下(1人) 回复此楼
8楼2013-09-17 13:56:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hia_25

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
在用primer star时，说明书上提过，退火时间的长短可能会影响条带是否出现这样的弥散，楼主可以试一下
赞一下 回复此楼
9楼2013-09-17 16:56:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

laojiu9878

至尊木虫 (文坛精英)

九牛

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
染色试剂多点，在清水浸泡2h
赞一下 回复此楼
但愿人长久
10楼2013-09-18 14:15:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 jxmingcyl 的主题更新
101/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 Aj1rhIDL5ixY 2026-09-14 3/150 2026-09-15 10:38 by VMDqgnlKimtZ
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +4 6F5UbRU2I5hL 2026-09-14 4/200 2026-09-15 08:02 by C79jjtjAKjEn
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +4 s3fFTmArrBt6 2026-09-14 4/200 2026-09-15 07:50 by C79jjtjAKjEn
[公派出国] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 s3fFTmArrBt6 2026-09-14 3/150 2026-09-15 07:14 by C79jjtjAKjEn
[教师之家] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +4 s3fFTmArrBt6 2026-09-13 4/200 2026-09-15 06:50 by 5BDX0d0WFp7t
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 3n8v2C8RimXI 2026-09-13 4/200 2026-09-15 06:01 by 5BDX0d0WFp7t
[博后之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +6 3n8v2C8RimXI 2026-09-13 6/300 2026-09-15 05:50 by 5BDX0d0WFp7t
[硕博家园] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 3n8v2C8RimXI 2026-09-13 3/150 2026-09-15 05:26 by 5BDX0d0WFp7t
[考研] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +5 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 6/300 2026-09-15 05:13 by 5BDX0d0WFp7t
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +6 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 8/400 2026-09-15 05:01 by mibUvS8DDCwf
[博后之家] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 s3fFTmArrBt6 2026-09-13 4/200 2026-09-14 23:24 by vZfe6xYu34yj
[公派出国] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 LwdutQ8HoqWP 2026-09-13 6/300 2026-09-14 22:37 by vZfe6xYu34yj
[找工作] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +5 3n8v2C8RimXI 2026-09-13 5/250 2026-09-14 22:13 by vZfe6xYu34yj
[博后之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +4 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 4/200 2026-09-14 21:37 by vZfe6xYu34yj
[考博] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 5/250 2026-09-14 21:36 by vZfe6xYu34yj
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 5/250 2026-09-14 21:25 by vZfe6xYu34yj
[教师之家] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 LwdutQ8HoqWP 2026-09-13 4/200 2026-09-14 16:13 by Aj1rhIDL5ixY
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 3/150 2026-09-14 15:09 by Aj1rhIDL5ixY
[基金申请] 求教各位大神：2026教育部人文社科青年基金项目何时公示呀？ +5 云宴山人 2026-09-10 7/350 2026-09-14 12:11 by ecnu2013
[教师之家] 浙江师范大学是怎么坑我的 +10 recruit123 2026-09-09 15/750 2026-09-13 10:45 by seaskyy
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭