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1M Tris溶解多肽为什么溶液变粘稠？
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RT，我无意中拿了1M的Tris-Hcl 溶解了一个多肽，结果溶液变的粘稠，而用10mM的Tris以及hepes、NaAC-HAC这些缓冲液溶解都没有类似的情况。这个1M Tris溶的肽我拿去和铜离子滴定，发现有结合，而溶在其他buffer里的同样的肽却没有结合，这是什么原因？是因为这个肽只有在这么高浓度的tris里才能有特定的结构和铜结合还是高浓度的Tris和肽发生了什么反应导致实验仪器误判，和铜无关？ 我的这个肽长24个aa，偏碱性，偏亲水性。 |
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4楼2013-09-18 10:09:36
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【答案】应助回帖
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| 1。tris本身含氨基，能和铜络合。2.1M的tris本身就有点粘，但不明显，可能是多肽在水中溶解度有限，而tris竞争了大量的氢键导致肽成凝胶状，估计再加tris，肽就要析出了。3.不排除多肽在高盐情况下出现了组装，或形成了特定的高级结构。4.LZ可以用相应离子强度的非氨体系试试能否重复出这个结果，再试试无机氨体系，看是不是Tris的专有反应（Tris含氨基和羟基，都可以配位Cu) |
2楼2013-09-13 13:59:59
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我用空白的1Mtris和铜滴定没有峰出现。我用几个位点突变了的此肽溶于1Mtris和铜滴定也没有峰。。。看上去似乎还是和此肽有关。不过我这个肽是在公司合成的，拿到手的时候感觉没有冻干，不是那种冻干粉的状态，而是冰块状，然后我拿这个肽去做出了那次有峰的结果，后来我觉得这个肽不保险，就让公司重新冻干了（还是冰块状，但是体积缩小）之后给我，我再去拿了用10mM的Tris溶了就做不出来了。那销售说可能第一次的里面会残留有乙腈，但是技术却一口咬定不会有乙腈。我对这个合成不懂，似乎是用反相色谱，报告单上写着A相是TFA。。乙腈应该是能和铜结合的，不过冻在-80度里乙腈不会挥发掉吗？而且就算有残余稀释到实验浓度时是不是已经很少了？。不知道是因为第一次的肽里面有乙腈出现了假象，还是因为第二次刻意再去冻干使得此肽受到了破坏。。。。纠结无比，难道此实验将永无定论？  |
3楼2013-09-18 09:43:01