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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 测酶活
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风吹我已散

木虫 (正式写手)

[求助] 测酶活

看到一篇文献上的测酶活，有些不懂，恳请各位帮忙：
15 μl of enzyme,solution was added to 35 μl of a mix containing 25.6 μl of 50mM Tris buffer (pH 7.5), 2.5 μl of 0.1M DTE, 2.5 μl of BSA stock solution (50 mg/ml), 2.0 μl solution at 10 μCi/ml of [14C]acetyl-CoA (Sigma) in 50 mM KH2PO4, pH 4.5 (44000 d.p.m., final concentration of 9 μM in the assay), and 2.4 μl of unlabelled AcAc-CoA (Sigma) in 50 mM KH2PO4 (pH 4.5) to give an equimolar concentration in the assay. After a 10 min incubation at 30 ◦C (linear range), the reaction was stopped by addition of 6M HCl.
问题如下：
1. Tris  buffer 是做什么的， PH为什么要是7.5？
2. “ 2.0 μl solution at 10 μCi/ml of [14C]acetyl-CoA (Sigma) in 50 mM KH2PO4” 如何理解？到底是多少acetyl-CoA溶解在50 mM  KH2PO4 里？
3. “44000 d.p.m., final concentration of 9 μM in the assay” 是什么意思？
4."2.4 μl of unlabelled AcAc-CoA (Sigma) in 50 mM KH2PO4 (pH 4.5) to give an equimolar concentration in the assay"里“give an equimolar concentration in the assay”是什么意思？
5. 6M HCl 是什么意思呢， 是6M/L 的HCl ，还是6M HCl ？如果是后者的话是不是也太多了？前者的话到底要加多少HCL?
本人新手，太多不懂。请各位帮忙，谢谢啦。
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1楼 2013-09-09 09:15:58
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因为吃饭

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
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风吹我已散: 金币+1, ★有帮助 2013-09-09 13:33:04
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2013-09-09 15:10:43
1、Tris  buffer 就是反应缓冲液，pH7.5应该是你那个酶的最适反应pH
2、加2.0 μl的溶液，为 50 mM  KH2PO4 的溶液里含有10 μCi/ml 的acetyl-CoA
5、6M HCl 是6mol/L的HCL。M是mol/L的缩写。
3和4 就不清楚啦
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辩证。
2楼2013-09-09 09:34:11
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xiaopeiliang

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

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风吹我已散: 金币+1, ★有帮助 2013-09-09 13:33:11
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2013-09-09 15:10:53
1.Tris就是Tris-Hcl啊，一般测酶活用这个缓冲液或者PBS，pH肯定是你这个酶比较适宜的，这个有什么好纠结的
2.将你的10uCi/ml的acrtyl-CoA加入pH4.5,50mM KH2PO4溶液中，终浓度是9uM，d.p.m不知道是什么的缩写
3. equimolar是指与上面的终浓度相等的意思9uM
4.大写M或者uM都是mol/L或者umol/L的缩写
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3楼2013-09-09 10:13:51
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风吹我已散

木虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by xiaopeiliang at 2013-09-09 10:13:51
1.Tris就是Tris-Hcl啊，一般测酶活用这个缓冲液或者PBS，pH肯定是你这个酶比较适宜的，这个有什么好纠结的
2.将你的10uCi/ml的acrtyl-CoA加入pH4.5,50mM KH2PO4溶液中，终浓度是9uM，d.p.m不知道是什么的缩写
3.  ...

10uCi/ml的acrtyl-CoA 换算成普通的acrtyl-CoA怎么算？是多少单位的acrtyl-CoA？
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4楼2013-09-09 13:37:07
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xiaopeiliang

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
风吹我已散: 金币+1, ★有帮助 2013-09-09 19:52:44
引用回帖:
4楼: Originally posted by 风吹我已散 at 2013-09-09 13:37:07
10uCi/ml的acrtyl-CoA 换算成普通的acrtyl-CoA怎么算？是多少单位的acrtyl-CoA？...

这个真没见过，Ci是表示放射性物质的那个居里的单位吗，需要你自己查文献了
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5楼2013-09-09 14:16:58
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yimingwang

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
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风吹我已散: 金币+1, ★有帮助 2013-09-09 19:52:36
引用回帖:
5楼: Originally posted by xiaopeiliang at 2013-09-09 07:16:58
这个真没见过，Ci是表示放射性物质的那个居里的单位吗，需要你自己查文献了...

Ci是居里单位。这个方法就是要恒定加入的放射性标记的量，从而方便最终计算。
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Let'sdoit.
6楼2013-09-09 16:24:04
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