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风吹我已散木虫 (正式写手)
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测酶活
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看到一篇文献上的测酶活，有些不懂，恳请各位帮忙： 15 μl of enzyme,solution was added to 35 μl of a mix containing 25.6 μl of 50mM Tris buffer (pH 7.5), 2.5 μl of 0.1M DTE, 2.5 μl of BSA stock solution (50 mg/ml), 2.0 μl solution at 10 μCi/ml of [14C]acetyl-CoA (Sigma) in 50 mM KH2PO4, pH 4.5 (44000 d.p.m., final concentration of 9 μM in the assay), and 2.4 μl of unlabelled AcAc-CoA (Sigma) in 50 mM KH2PO4 (pH 4.5) to give an equimolar concentration in the assay. After a 10 min incubation at 30 ◦C (linear range), the reaction was stopped by addition of 6M HCl. 问题如下： 1. Tris buffer 是做什么的， PH为什么要是7.5？ 2. “ 2.0 μl solution at 10 μCi/ml of [14C]acetyl-CoA (Sigma) in 50 mM KH2PO4” 如何理解？到底是多少acetyl-CoA溶解在50 mM KH2PO4 里？ 3. “44000 d.p.m., final concentration of 9 μM in the assay” 是什么意思？ 4."2.4 μl of unlabelled AcAc-CoA (Sigma) in 50 mM KH2PO4 (pH 4.5) to give an equimolar concentration in the assay"里“give an equimolar concentration in the assay”是什么意思？ 5. 6M HCl 是什么意思呢， 是6M/L 的HCl ，还是6M HCl ？如果是后者的话是不是也太多了？前者的话到底要加多少HCL? 本人新手，太多不懂。请各位帮忙，谢谢啦。 |
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1.Tris就是Tris-Hcl啊，一般测酶活用这个缓冲液或者PBS，pH肯定是你这个酶比较适宜的，这个有什么好纠结的 2.将你的10uCi/ml的acrtyl-CoA加入pH4.5,50mM KH2PO4溶液中，终浓度是9uM，d.p.m不知道是什么的缩写 3. equimolar是指与上面的终浓度相等的意思9uM 4.大写M或者uM都是mol/L或者umol/L的缩写 |
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