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luba

新虫 (小有名气)

[求助] 1M Tris溶解多肽为什么溶液变粘稠?

RT,我无意中拿了1M的Tris-Hcl 溶解了一个多肽,结果溶液变的粘稠,而用10mM的Tris以及hepes、NaAC-HAC这些缓冲液溶解都没有类似的情况。这个1M Tris溶的肽我拿去和铜离子滴定,发现有结合,而溶在其他buffer里的同样的肽却没有结合,这是什么原因?是因为这个肽只有在这么高浓度的tris里才能有特定的结构和铜结合还是高浓度的Tris和肽发生了什么反应导致实验仪器误判,和铜无关?
我的这个肽长24个aa,偏碱性,偏亲水性。
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hl16010921

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
wizardfan: 金币+2, 谢谢分析,欢迎交流 2013-09-14 07:05:23
luba: 金币+5, ★★★★★最佳答案, 非常感谢!我按你说的试试! 2013-09-15 22:12:54
1。tris本身含氨基,能和铜络合。2.1M的tris本身就有点粘,但不明显,可能是多肽在水中溶解度有限,而tris竞争了大量的氢键导致肽成凝胶状,估计再加tris,肽就要析出了。3.不排除多肽在高盐情况下出现了组装,或形成了特定的高级结构。4.LZ可以用相应离子强度的非氨体系试试能否重复出这个结果,再试试无机氨体系,看是不是Tris的专有反应(Tris含氨基和羟基,都可以配位Cu)
2楼2013-09-13 13:59:59
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hl16010921

木虫 (正式写手)

1.一般冻干前会旋蒸掉乙腈和TFA,否则伤冻干机,但由于TFA和多肽的氨基成盐会残余一些。2.一般只要不反复冻融多肽还是稳定的。冻干不会影响多肽的。3.会不会和肽的浓度有关,因为多肽的状态不同质量称量可能误差很大。建议用紫外光谱看看定一下浓度(如果用HPLC定量更准)4.先别急,先想好两次实验的差异,再一个因素一个因素的加上去。tris-HCl pH值是不变的,乙腈可能会对多肽的结构有影响,掺入微量的乙腈试试。另外该肽有无半胱氨酸这样的不稳定氨基酸或二硫键,稳定性如何?实在不行也别放在心上,毕竟只是意外的收获,原定的实验计划还是主要的。
4楼2013-09-18 10:09:36
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