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食品虫虫

铜虫 (初入文坛)

应助: 1 (幼儿园)
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虫号: 2052815
注册: 2012-10-10
性别: GG
专业: 食品科学基础

[求助] 绿脓杆菌平板计数问题已有1人参与

1.我做的绿脓杆菌（好氧菌、兼性厌氧菌）倾注培养，稀释度做到-8、-9、-10、-11，只记录有明显特征的菌落发现菌落梯度不是很明显，几个梯度做的计数差不多，并且均大于30且不超过300，平板表面有很多可见的大菌落，但是有很多的小点生长培养基内部（附图如下），不确定是否是绿脓杆菌，如果记录，-8、-9、-10三个稀释度的菌落就会超过300，但是由于小点过小，计数十分困难，且培养多久均不能生长成容易计数的菌落。因此我做了小验证试验：将仅有小点的菌落切下一块放入LB培养基中摇瓶培养发现菌液变绿（绿脓杆菌液体摇瓶特征），菌液

革兰氏染色也为阴性菌，且显微镜下显示绿脓杆菌特征。
2.请问除了增大稀释度还能如何处理这种情况，上述方法是否能证明小点是绿脓杆菌？计数时是否需要记录这些小点？是否有人做倾注时在其他菌上也有类似情况？

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加油，笨

1楼 2013-09-06 13:17:33

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mizhoulong

木虫 (著名写手)

环境卫生、微生物学

MicEPI: 2
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【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
食品虫虫: 金币+10, ★★★很有帮助, 谢谢 2013-09-16 14:45:25

1.首先确定你的菌是不是纯菌——划线接种分单菌落，鉴定单菌落；
2.其次确定你的培养基有无污染——将空白平板倒置于温箱中培养72小时；
3.再次确定你的培养过程有无污染——实验的每一个步骤都设置空白对照；
4.最后确定你的原始样品中有无细小颗粒——食品、化妆品中常见。
——————————————————————————————————————

以上都确定无误后，将纯菌在富营养培养基上（TSA常用）传代两次，将新鲜培养的细菌斜面洗下来（总量一般为10E9 CFU~10E11CFU,系列稀释到10E-10，接种10E-7~10E-9，一般可测出原始菌液浓度。

培养48h以后，因为使用倾注法，在琼脂内部的菌落生长不良，一般呈细小的点，表面的因为接触空气，能长得饱满。

希望能有用。