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绿脓杆菌平板计数问题 已有1人参与
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1.我做的绿脓杆菌（好氧菌、兼性厌氧菌）倾注培养，稀释度做到-8、-9、-10、-11，只记录有明显特征的菌落发现菌落梯度不是很明显，几个梯度做的计数差不多，并且均大于30且不超过300，平板表面有很多可见的大菌落，但是有很多的小点生长培养基内部（附图如下），不确定是否是绿脓杆菌，如果记录，-8、-9、-10三个稀释度的菌落就会超过300，但是由于小点过小，计数十分困难，且培养多久均不能生长成容易计数的菌落。因此我做了小验证试验：将仅有小点的菌落切下一块放入LB培养基中摇瓶培养发现菌液变绿（绿脓杆菌液体摇瓶特征），菌液 革兰氏染色也为阴性菌，且显微镜下显示绿脓杆菌特征。2.请问除了增大稀释度还能如何处理这种情况，上述方法是否能证明小点是绿脓杆菌？计数时是否需要记录这些小点？是否有人做倾注时在其他菌上也有类似情况？  20130904_153323.jpg  20130904_153818.jpg  20130904_153829.jpg |
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2楼2013-09-06 16:32:00
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1.首先确定你的菌是不是纯菌——划线接种分单菌落，鉴定单菌落； 2.其次确定你的培养基有无污染——将空白平板倒置于温箱中培养72小时； 3.再次确定你的培养过程有无污染——实验的每一个步骤都设置空白对照； 4.最后确定你的原始样品中有无细小颗粒——食品、化妆品中常见。 —————————————————————————————————————— 以上都确定无误后，将纯菌在富营养培养基上（TSA常用）传代两次，将新鲜培养的细菌斜面洗下来（总量一般为10E9 CFU~10E11CFU,系列稀释到10E-10，接种10E-7~10E-9，一般可测出原始菌液浓度。 培养48h以后，因为使用倾注法，在琼脂内部的菌落生长不良，一般呈细小的点，表面的因为接触空气，能长得饱满。 希望能有用。 |
6楼2013-09-09 09:07:53
mizhoulong
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